طريقة أنبوب الأسطوانة المعدلة للثقافة طويلة الأمد لشرائح دماغ القوارض

الملخص

المصدر: Fixman ، B. B. ، et al. طريقة أنبوب الأسطوانة المعدلة للتصوير المتقطع الموضعي والمتكرر بدقة أثناء الثقافة طويلة المدى لشرائح الدماغ في نظام مغلق. J. Vis. Exp. (2017).

يوضح هذا الفيديو طريقة أنبوب أسطواني معدلة لزراعة شرائح الدماغ على المدى الطويل من نموذج القوارض. أولا ، يتم إرفاق شرائح الدماغ بطبقات الأغطية. بعد ذلك ، يتم أخذ أنابيب الأسطوانة ذات الجوانب المسطحة ذات الفتحة على الجانب المسطح ، ويتم وضع أغطية الغطاء على الفتحة باستخدام أقراص لاصقة. أخيرا ، يضاف وسط مغذي وثاني أكسيد الكربون وخليط الهواء إلى الأنبوب ، ويتم تحضين الأنابيب بحركة متدحرجة.

البروتوكول

تم تنفيذ جميع الإجراءات التي تنطوي على جمع العينات وفقا لإرشادات IRB الخاصة بالمعهد.

ملاحظة: يصف البروتوكول أدناه طريقة التحضير والثقافة للحضانة طويلة الأمد والتصوير المتقطع لشرائح الحصين. يتم إرفاق شريحة حصين واحدة بغطاء محفور ضوئي معد خصيصا باستخدام جلطة بلازما ، ثم يتم إغلاق الغطاء على الجانب المسطح من أنبوب أسطواني محفور ، والذي يتم صيانته في حاضنة أسطوانة.

فئة

1. تحضير رف أنبوب الأسطوانة

1. استخدم القالب الموضح في الشكل 1 أ المطبوع بالحجم الموضح على شريط المقياس. باستخدام مسمار ، قم بعمل ثقوب صغيرة (كبيرة بما يكفي لعلامة نقطة دقيقة) في القالب الم....

النتائج

p class = "jove_content" fo: keep-together.within-page = "1" >
الشكل 1: تحضير رف أنبوب الأسطوانة. (أ) قالب لتمييز مواضع الثقب لحفر قيعان أطباق زراعة الأنسجة مقاس 15 سم. إذا تمت طباعة الشكل بحجم شريط المقياس الموضح ، فيمكن قصه واستخدامه لتمييز المواضع على طبق ثقافة مقاس 15 سم لحفر الثقوب المعروضة. (ب) اكتمل رف أنبوب الأسطوانة مع إدخال أنبوبين. يتم ترقيم كل رف على ملصق يمكن رؤيته بسهولة في الجزء العلوي من الرف.

<.......

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات قيعان من أطباق ثقافة 15 سم VWR العلمية هاتف: 25384-326 مسامير آلة فيليبس (# 10-32) أجهزة الآس 2.5 بوصة طول وقطر 3/16 بوصة غسالات مسطحة # 10 أجهزة الآس آلة الصواميل اللولبية (# 10-32) أجهزة الآس حلقات مطاطية أجهزة الآس 5/16 "، سميكة ؛ 5/8 "، قطر الثقب ؛ 1.125 "، OD أنابيب البولي إيثيلين (5/16 بوصة ؛ OD ، 3/16 "؛ الهوية) أجهزة الآس قطع إلى طول 1.8 بوصة غسالة القفل # 10 أجهزة الآس مكبس الحفر ، 5 سرعات أجهزة الآس Nunclon دلتا أنابيب مسطحة الجوانب VWR 62407-076 لقم الثقب ، 3 مم ، 6 مم ، 15 مم أجهزة الآس ماركة ديابلو فرويد لقم الثقب لقطع البلاستيك لقم ثقب للخشب ، 1.5 سم و 1 مم أجهزة الآس ملف خشبي ، 1/4 "دائري أجهزة الآس مشابك زنبركية، حامل كبس 16 مم أجهزة الآس أداة إزالة الحواف ذات الرأس الدوار ، 5 " أجهزة الآس هاتف: 26307 ورقة سيليكون لاصقة (ختم آمن) جريس بيو لابز 666581 سمك 0.5 مم ثقب ثقب 6 مم مكتب ماكس ثقب ثقب 12 مم thepunchbunch.com 70٪ إيثانول أغطية فوتوتيكيد بقطر 12 مم شركة بيلكو للزجاج بنسن المووقد الإيثانول المطلق مياه نانو نقية 3-أمينوبروبيل تري إيثوكسيلين سيجما ألدريتش أ3648 أسيتون سيجما ألدريتش 179124 # 5 ملقط دومون أدوات العلوم الدقيقة 11251-30 ماكلوين مروحية مناديل تيد بيلا ، إنك. 10180 شفرات حلاقة مزدوجة الحواف تيد بيلا ، إنك. 121-6 ورق ترشيح Whatman VWR هاتف: 28450-182 مقطعة إلى دوائر قطرها 5.8 سم بولي كلورو ثلاثي فلورو إيثيلين (أكلار) تيد بيلا ، إنك. 10501-10 مقطعة إلى دوائر قطرها 5.8 سم # 21 شفرة جراحية VWR العلمية هاتف: 25860-144 # 5 ملقط دومون أدوات العلوم الدقيقة 11251-30 ملعقة، غير قابلة للصدأ بنهاية مدببة VWR 82027-518 محلول الملح المتوازن من Gey's سيجما ألدريتش جي 9779 الجلوكوز ثيرموفيشر العلمي 15023-021 محلول 25٪ (وزن / حجم) ، فلتر 0.2 مم معقم بلازما دجاج كوكاليكو بيولوجيكس 30-0300-5 لتر أعد الترطيب في الماء المعقم ، وجهاز الطرد المركزي عند 2500 × جم 30 دقيقة عند 4 درجات مئوية ، والتجميد السريع في النيتروجين السائل وتخزينه في -80 درجة مئوية. الثرومبين الموضعي (البقري) شركه فايزر الثرومبين - JMI يتم تجميد كميات سريعة في النيتروجين السائل عند 1,000 وحدة دولية / مل في المادة المخففة المتوفرة وتخزينها عند -80 درجة مئوية. نظام الأسطوانة الخلوية بيلكو للتكنولوجيا الحيوية SciERA حاضنة الأسطوانة فورما الموديل: 3956