تحليل بقاء خلايا بركنجي في مزارع شرائح المخيخ العضوية

الملخص

المصدر: Rakotomamonjy, J., et al. بقاء خلية بركنجي في مزارع شرائح المخيخ العضوية. J. Vis. Exp. (2019)

يوضح هذا الفيديو تقنية للحصول على شرائح عضوية مخيخية من دماغ جرو الفأر وزراعة الشرائح في وسائط مكملة بالعناصر الغذائية وعوامل النمو لتقليد نمو المخيخ في المختبر. بالإضافة إلى ذلك ، يتم التعامل مع شرائح مخيخية معينة بمركب اختبار ، ويتم تحليل قدرة الحماية العصبية للمركب باستخدام تقنية تلطيخ التألق المناعي.

البروتوكول

< p class = "jove_title" >1. التحضير قبل زراعة شرائح المخيخ

العضوية

1. في غطاء مزرعة الخلية الذي تم رشه بنسبة 70٪ من الإيثانول مسبقا ، قم بإعداد 200 مل من وسط المزرعة في مرشح تفريغ أعلى زجاجة سعة 250 مل متصل بجهاز استقبال زجاجة معقم. أضف 100 مل من النسر القاعدي المتوسط (BME) ، و 50 مل من محلول الملح المتوازن من هانكس (HBSS) ، و 50 مل من مصل الحصان المعطل بالحرارة ، و 1 مل من 200 مل من L-Glutamine (التركيز النهائي 1 مل) ، و 5 مل من 200 جم / لتر من الجلوكوز (التركيز النهائي 5 مجم / مل). قم بتصفية وسط الاستزراع بالمكنسة الكهربائية واحتفظ به عند +4 درجة مئوية لمدة تصل إلى شهر.
2. في خزانة السلامة الحيوية المعقمة ، أخرج لوحة ثقافة مكونة من 6 آبار من عبوتها. املأ....

النتائج

الشكل 1: رسم توضيحي للبروتوكول من التشريح إلى القياس الكمي لبقاء خلية بركنجي. يتم قطع رأس جرو الفأر بسرعة (أ). بعد تشريح الدماغ ، يتم عزل المخيخ (B) ، ثم يتم تقطيعه إلى شرائح بعرض 350 ميكرومتر (C). توضع الأقسام المخيخية على إدراج مزرعة الخلايا المعالج أو الضابط (D) ويتم الاحتفاظ بها في المزرعة لمدة 5 أيام على الأقل في المختبر. ثم يتم.......

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات Alexa Fluor 594 الحمار المضاد للفأر IgG الجسم المضاد الثانوي ثيرموفيشر العلمي أ 21203 النسر القاعدي المتوسط (BME) ثيرموفيشر العلمي 21010046 خزانة السلامة الحيوية من الفئة الثانية ، النوع A2 نوير NU-540-400 ألبومين مصل الأبقار ميليبور سيجما أ 2153 فرش الجسم المضاد المضاد للكالبندين D-28K (CB-955) أبكام أب82812 حاضنة ثاني أكسيد الكربون₂ نوير NU-5700 لوحات ثقافة الخلايا المسطحة من Corning Costar ذات 6 آبار فيشر ساينتيك 07-200-83 أغطية ، 22 × 50 مم فيشر ساينتيك 12-545-ه ملقط خلع الملابس ، مستقيم جهاز هارفارد 72-8949 شفرات مزدوجة الحواف فيشر ساينتيك 50949411 دليل الإيثانول 200 مختبرات ديكون ، وشركة 2701 مقص العين ، مستقيم جهاز هارفارد 72-8428 ملقط ناعم فيشر ساينتيك 16-100-127 L-جلوتامين 100X ثيرموفيشر العلمي 25030149 محلول الجلوكوز ثيرموفيشر العلمي A2494001 محلول الملح المتوازن من هانكس ثيرموفيشر العلمي 14025092 Hoechst 33342 ، ثلاثي هيدروكلوريد ، ثلاثي الهيدرات فيشر ساينتيك H21492 مصل الحصان ، معطل بالحرارة ، من أصل نيوزيلندي ثيرموفيشر العلمي 26050088 إيمج جيه ماكلوين مروحية مناديل فيشر ساينتيك NC9914528 المجسات الدقيقة فيشر ساينتيك 08-850 إدراج ثقافة الخلايا Millicell ميليبور سيجما PICM0RG50 وحدات التصفية المعقمة سريعة التدفق من Nalgene مع غشاء PES ، 250 مل ثيرموفيشر العلمي 168-0045 نظام مجهر ليزر متحد البؤر من نيكون A1R نيكون برنامج التصوير NIS-Elements نيكون بارافورمالدهيد أكروس أورجانكس هاتف: 41678-0010 ماصات باستور فيشر ساينتيك 13-678-20 د كلوريد البوتاسيوم فيشر ساينتيك BP366-500 ProLong Gold Antifade Mountant ثيرموفيشر العلمي ص10144 مقص التشغيل ، مستقيم جهاز هارفارد 72-8403 شاكر المداري الراقصة الشرقية IBI Scientific BDRLS0003 المنشور 8 لوحة الرسم البياني شرائح مجهر Superfrost Plus فيشر ساينتيك 12-550-15 طبق زراعة الأنسجة، 60 مم مع حلقة قبضة فيشر ساينتيك FB012921 صفيحة زراعة الأنسجة ، 24 بئر فالكون / كورنينج 353047 نقل الماصات المعقمة ثيرموفيشر العلمي 13-711-21 تريتون X-100 ثيرموفيشر العلمي بي بي 151-500