توليد الكرات من الخلايا الجذعية البشرية متعددة القدرات

الملخص

المصدر: Shaker، M.R.، et al. جيل قوي وقابل للتكرار بدرجة كبيرة من عضيات الدماغ القشرية لنمذجة الشيخوخة العصبية في الدماغ في المختبر.

يوضح هذا الفيديو تحول الخلايا الجذعية البشرية متعددة القدرات (hPSCs) إلى عضيات دماغية كروية. باستخدام مثبطات محددة ، يتم توجيه hPSCs للتمايز نحو سلالة عصبية ، وتشكيل مستعمرات الأديم العصبي. ثم يتم إدخال عوامل نمو خاصة ، والتي تشجع التنظيم الذاتي وانتشار المستعمرات ، مما يؤدي في النهاية إلى تكوين عضيات كروية في الدماغ.

البروتوكول

< p class = "jove_title" >1. توليد العضوية القشرية في الدماغ (الشكل 1)

ملاحظة: ستحدث جميع الخطوات الواردة في هذا القسم من البروتوكول في غطاء السلامة البيولوجية من الفئة 2 ما لم ينص على خلاف ذلك.

1. تحريض مستعمرات الأديم العصبي الظاهر ثنائي الأبعاد من الخلايا الجذعية البشرية متعددة القدرات (hPSCs) مزرعة ثنائية الأبعاد (أيام -1 إلى 3)
   1. قبل الحث ، قم بوضع مستعمرات hPSC على مصفوفة غشاء القاعد المؤهلة للخلايا الجذعية الجنينية البشرية (hESC) في صفيحة مكونة من 6 آبار بكثافة 20٪ -30٪. حقق هذه الكثافة عن طريق تمرير مستعمرات hPSC من بئر واحد من صفيحة مكونة من 6 آبار عند التقاء 60٪ إلى ثلاثة آبار من....

النتائج

الشكل 1: رسم تخطيطي لتوليد عضيات الدماغ القشرية القابلة للتكرار. سير العمل التخطيطي للإجراء التجريبي لتوليد عضيات الدماغ القشرية من hPSCs المحفوظة في الوسط الخالي من التغذية. يوفر سير العمل نظرة عامة على ست خطوات متضمنة في تمييز hPSCs ثنائية الأبعاد إلى أنسجة بشرية صفيحة قشرية منقوشة ثلاثية الأبعاد في العضيات.

....

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات 16٪ فورمالديهايد (W / V) خال من الميثانول ثيرمو فيشر العلمي هاتف 28908 يتم تخفيف 4٪ من PFA في 1x PBS 2-ميركابتو إيثانول 50 مل (1000 ضعف) لايف تكنولوجيز أستراليا (TFS) 21985023 تستخدم في وسائط NM و DM ب 27 مكمل غذائي 10 مل لايف تكنولوجيز أستراليا (TFS) 17504044 تستخدم في وسائط NM و DM مجهر CKX53 مع كاميرا SC50 أوليمبوس لوحات زراعة خلايا الآبار Corning Costar 6 سيجما ألدريتش بي تي واي المحدودة CLS3516-50EA مسحوق Dispase II ثيرمو فيشر العلمي 17105041 يذوب المسحوق في HBSS ، ويتم ترشيحه من خلال مرشح 0.22 ميكرومتر ، ويتم تخزينه عند 10 مل وتخزينه عند -20 درجة مئوية DMEM مزيج المغذيات F12 10x 500 مل (DMEM / F-12) ثيرموفيشر 11320082 تستخدم في وسائط NM و DM DMSO ثنائي ميثيل سلفوكسيد سيجما ألدريتش بي تي واي المحدودة D2650-100 مل محلول ملحي مخزن بالفوسفات من Dulbecco سيجما ألدريتش بي تي واي المحدودة D1408-500 مل مصفوفة Falcon Matrigel hESC المؤهلة في المختبر تكنولوجيز بي تي واي المحدودة FAL354277 قم بعمل كميات كبيرة من 100 ميكرولتر وتخزينها عند -20 درجة مئوية مكمل GlutaMAX 100x ثيرمو فيشر العلمي 35050061 تستخدم في وسائط NM و DM محلول الملح المتوازن هانكس سيجما ألدريتش بي تي واي المحدودة H8264 الخلايا الجذعية متعددة القدرات المستحثة البشرية (EU79) مخطط داخلي من الخلايا الليفية الجلدية الخلايا الجذعية متعددة القدرات المستحثة البشرية (G22) خلايا جينيا الحيوية تم الحصول عليها من Genea Biocells (سان دييغو ، الولايات المتحدة) الخلايا الجذعية متعددة القدرات المستحثة البشرية (WTC) هدية من البروفيسور بروس كونكلين InSolution TGF-Β RI Kinase Inhibitor VI ، SB431542 ميرك US1616464-5 ملغ محلول الأنسولين المؤتلف البشري سيجما ألدريتش بي تي واي المحدودة I9278 تستخدم في وسائط NM و DM LDN193189 ثنائي هيدروكلوريد سيجما ألدريتش بي تي واي المحدودة SML0559-5 ملغ تستخدم أثناء التمايز محلول الأحماض الأمينية غير الأساسية MEM (100x) ثيرمو فيشر العلمي 11140050 تستخدم في وسائط NM و DM mTeSR Plus تقنيات الخلايا الجذعية 100-0276 تستخدم للحفاظ على مستعمرات hiPSC قبل التمايز باستخدام وسائط NM مكمل N2 5 مل (100x) لايف تكنولوجيز أستراليا بي تي واي المحدودة 17502048 تستخدم في وسائط NM و DM البنسلين الستربتومايسين (10,000 وحدة / مل) ثيرمو فيشر العلمي 15140122 تستخدم في وسائط NM و DM FGF البشري المؤتلف الأساسي أنظمة البحث والتطوير 233-FB-01M يتم إجراء الحصص عند 20 ميكروغرام / مل وتخزينها عند -20 درجة مئوية SB431542 توكرس 1614 تستخدم أثناء التمايز ألواح متعددة الآبار منخفضة للغاية ، لوح 24 بئرا ، بوليسترين سيجما ألدريتش بي تي واي المحدودة CLS3473-24 إيه