مقالة منهجية

توليد الخلايا العصبية الهرمية القشرية من الخلايا الجذعية العصبية البشرية

يوليو 8, 2025

في هذه المقالة

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصدر: Gouder ، L. ، et al. القياس الكمي ثلاثي الأبعاد للأشواك المتغصنة من الخلايا العصبية الهرمية المشتقة من الخلايا الجذعية متعددة القدرات المستحثة من الإنسان. J. Vis. Exp. (2015)

يصف هذا الفيديو طريقة لتحضير أغطية زجاجية مطلية بالبولي أورنيثين واللامينين لتعزيز التصاق ونمو الخلايا الجذعية العصبية. تتضمن هذه التقنية حضانات وغسلات متسلسلة ، مما يسهل تكوين مصفوفة داعمة تعزز نمو الخلايا العصبية وتمايزها ، وتحاكي الهياكل الموجودة في الخلايا العصبية.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. الثقافة العصبية
    ملاحظه: تم وصف إعادة برمجة الخلايا الليفية في الخلايا الجذعية متعددة القدرات ، والالتزام بنسب telencephalon الظهري ، والاشتقاق ، والتضخيم ، وبنك الأسلاف القشرية المتأخرة (LCP) في Boissart et al. كما تم إجراء التمايز العصبي للخلايا الشبيهة ب LCP وفقا ل Boissart et al مع تعديلات طفيفة. تم تطوير إجراءات أخرى لإعادة البرمجة المباشرة للخلايا الليفية إلى خلايا جذعية مستحثة متعددة القدرات ، تليها تمايزها إلى خلايا عصبية. تم الاحتفاظ بهذا البروتوكول لأنه يسمح بالإنتاج الانتقائي للخلايا العصبية الهرمية الجلوتاماتيرجية.
    1. عالج ألواح الاستزراع المكونة من 6 آبار بأغطية زجاجية مع بولي أورنيثين (مخفف إلى 1/6 في DPBS (محلول ملحي مخزن بالفوسفات من دولبيكو) ، تركيز المخزون 0.01٪) O / N ، متبوعا بثلاث غسلات في DPBS. ثم أضف اللامينين (تركيز المخزون 1 مجم / مل ، مخفف 500 مرة في DPBS) لمدة 10 ساعات على الأقل تحت غطاء التدفق.
    2. صفيحة وإرسال NSC بكثافة منخفضة (50,000 خلية / سم2) في ألواح استزراع 6 آبار مع أغطية زجاجية في 3 مل من وسط الاستزراع يتكون من DMEM (Dulbecco ′s Modified Eagle′s Medium) / F12 (500 مل) ، قارورتان (5 مل لكل منهما) من مكمل N2 ، قارورتان (10 مل لكل منهما) من مكمل B27 ، 10 مل من Pen-Streptomycin (البنسلين = 10,000 وحدة / مل والستربتومايسين = 10,000 وحدة / مل) ، 1 مل من 2-mercaptoethanol (محلول المخزون: 50 ملم) واللامينين (1/500) ، بدون عوامل النمو. خطوة حاسمة: نفذ هذه الخطوة بعناية عن طريق إضافة خلايا ذات حركات دوارة بطيئة لتقليل تجمع الخلايا.
    3. قم بإزالة وسط الثقافة. أضف وسط N2B27 الطازج الذي يحتوي على 2 ميكروغرام / مل من محلول اللامينين الطازج للحفاظ على الخلايا العصبية متصلة بالغطاء الزجاجي وتجنب التكتل. قم بتغيير الوسيط كل 3 أيام. احتفظ ببعض الوسط المتبقي (200 ميكرولتر) قبل إضافة وسط جديد لمنع الخلية من الجفاف. بدلا من ذلك ، تابع بسرعة وقم بتغيير الحجم الكلي (3 مل).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
لم يتم الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات PD-PBS (1X) ، بدون كالسيوم ، مغنيسيوم et فينول أحمر جيبكو / لايف تكنولوجيز 14190169 Poly-L-Ornithine محلول الكاشف الحيوي سيجما ألدريتش ص 4957 لامينين الفأر دوتشر دومينيك 354232 ملحق N2 جيبكو / لايف تكنولوجيز 17502048 مكمل B-27 بدون فيتامين أ (50X) جيبكو / لايف تكنولوجيز 12587010 DMEM / البندق. ميكس F-12 W / GLUT-I جيبكو / لايف تكنولوجيز 31331028 العصبي الطبي, SFM جيبكو / لايف تكنولوجيز 21103049 2-ميركابتو إيثانول جيبكو / لايف تكنولوجيز 31350-010 قلم ستيبتومايسين جيبكو / لايف تكنولوجيز 15140-122 غطاء زجاجي 13 مم VWR 631-0150 إطالة كاشف الذهب المضاد للبهتان avec DAPI جيبكو / لايف تكنولوجيز ص36931 توين (R) 20 Bioextra ، سائل لزج سيجما ألدريتش تشيمي ص 7949 الخلايا الليفية البشرية المستودع الحيوي لخط خلية كوريل جنرال موتورز 4603 وجنرال موتورز 1869 معهد كوريل للبحوث الطبية ، كامدن ، نيوجيرسي ، الولايات المتحدة الأمريكية حاضنة CO2 6 لوحات ثقافة بئر الماصة

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

مقالات ذات صلة