عزل الخلايا السلفية الجذعية العصبية عن منطقة الحبل الشوكي حول البطين للفأر البالغ

الملخص

المصدر: Mothe، A.، et al.، عزل الخلايا الجذعية العصبية / السلفية من المنطقة المحيطة بالبطين للجرذ البالغ والحبل الشوكي البشري.

يقدم هذا الفيديو طريقة لعزل الخلايا الجذعية العصبية / الخلايا السلفية من الأنسجة المحيطة بالبطين للحبل الشوكي في الفئران البالغة. تتضمن هذه التقنية احتضان شظايا الأنسجة في محلول يحتوي على إنزيمات محللة للبروتين لتعطيل المصفوفة خارج الخلية وإطلاق الخلايا. بعد ذلك ، يتم طلاء الخلايا المنبعثة في وسط يحتوي على عوامل نمو محددة تعزز تكاثر الجذع العصبي / السلف وتعزز التجميع في مجالات عصبية ثلاثية الأبعاد.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على عينات حيوانية والموافقة عليها من قبل لجنة المراجعة الأخلاقية الحيوانية المناسبة.

1. إعداد المخازن المؤقتة للتشريح ووسائط الثقافة

1. لعزل الحبل الشوكي للفئران ، قم بإعداد 100 مل من المخزن المؤقت للتشريح (1x PBS + 0.6٪ جلوكوز + 2٪ بنسلين - ستربتومايسين) وضعه في الثلاجة.
2. تحضير 100 مل متوسطة خالية من السيروم (SFM) ودفئها عند 37 درجة مئوية. لتحضير SFM ، أضف 2 ملي من L-glutamine و 100 ميكروغرام / مل من البنسلين والستربتومايسين و 2٪ B27 و 10٪ مزيج هرموني إلى وسط Neurobasal-A. لتحضير مزيج هرموني ، اصنع وسيطا 1: 1 DMEM / F12 يحتوي على 0.6٪ جلوكوز ، و 3 ملي مولار NaHC....

النتائج

p class = "jove_content" fo: keep-together.within-page = "1" >
الشكل 1. استئصال الصفيحة الفقرية للحبل الشوكي للفئران وتشريح المنطقة حول البطينين. (أ) في الطرف الذيلية المكشوفة للحبل الشوكي ، يتم إدخال الأحجار الكريمة خارج المدة في الجانب الجانبي للقناة الشوكية. (ب) يتم إجراء جروح صغيرة في الصفيحة على كل جانب من الفقرات ويتم تقشير الصفيحة بعناية لكشف الحبل الشوكي. (ج) الحبل الشوكي العنقي المكشوف بعد اس.......

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات 1x برنامج تلفزيوني تقنيات الحياة #10010023 المخزن المؤقت للتشريح 1x HBSS تقنيات الحياة #14175095 المخزن المؤقت للتشريح د-الجلوكوز سيغما # جي -6152 تحضير محلول مخزون الجلوكوز بنسبة 30٪ لمخزن التشريح ومزيج الهرمونات البنسلين - ستربتومايسين تقنيات الحياة # 15140-148 المخزن المؤقت للتشريح ووسط الثقافة عصبي - أ تقنيات الحياة # 10888-022 وسط الثقافة ل-جلوتامين، 200 ملي مولار تقنيات الحياة # 25030-081 وسط الثقافة ب 27 تقنيات الحياة #12587010 وسط الثقافة DMEM تقنيات الحياة #11885084 مزيج الهرمونات F12 تقنيات الحياة # 21700-075 مزيج الهرمونات NaHCO₃ سيغما # S-5761 تحضير محلول مخزون 7.5٪ NaHCO3 لمزيج الهرمونات هيبس سيغما #H9136 تحضير محلول مخزون HEPES 1M لمزيج الهرمونات إنسولين سيغما #I-5500 مزيج الهرمونات أبو ترانسفيرين سيغما #T-2252 مزيج الهرمونات بوتريسين سيغما # ص 7505 مزيج الهرمونات سيلينيوم سيغما #S-9133 مزيج الهرمونات البروجسترون سيغما #P-6149 مزيج الهرمونات EGF ، ماوس سيغما #E4127 تحضير 100 ميكروغرام / مل من المخزونات في B27 و aliquot ؛ EFH المتوسطة bFGF ، مؤتلف بشري سيغما #F0291 تحضير 100 ميكروغرام / مل من المخزونات في B27 و aliquot ؛ EFH المتوسطة الهيبارين ، 10,000 وحدة سيغما #H3149 تحضير 27.3 ملغم / مل مخزون في مزيج الهرمونات والأسماكت. EFH المتوسطة طقم تفكك غراء ورثينجتون للكيماويات الحيوية #LK003150 يحتوي على EBSS ، غراء ، DNase ، مثبط البروتياز البيضي مع BSA البنتوباربيتال الصوديوم بيميدا - شركة MTC لصحة 00141704 DIN ملقط الأنسجة: أديسون أدوات العلوم الدقيقة # 11006-12 طرف قياسي مسنن ؛ طرف صغير متاح أيضا ملقط ناعم: دومون # 4 أدوات العلوم الدقيقة # 11241-30 مقص دقيق أدوات العلوم الدقيقة # 15024-10 Vannas ذات مقبض دائري رونجور Bausch & Lomb ن1430 أطباق بتري 10 مم نونك 1501 قوارير ثقافة T25 نونك 156367 6 أطباق بئر نونك CA73520-906