توليد شريحة دماغية إكليلية تكشف مناطق اللوزة من دماغ الفأر

الملخص

المصدر: Bosch, D., et al. Ex Vivo التشريح البصري الوراثي لدوائر الخوف في شرائح الدماغ. J. Vis. Exp. (2016).

يوضح هذا الفيديو تحضير شرائح رقيقة من الدماغ الإكليلي من دماغ الفئران ، مما يكشف عن مناطق اللوزة الغنية بالوصلات المشبكية من قشرة الفص الجبهي الإنسي. ثم يتم استرداد الشرائح في السائل الدماغي النخاعي الاصطناعي المؤكسج للحفاظ على بقاء الخلايا العصبية.

البروتوكول

< ص الفئة = "jove_title" >1. تحضير الشرائح الحادة

1. تحضير ACSF ، محلول القطع ، الأدوات (المقص ، المشرط ، الملقط ، الملعقة ، ماصة باستور) ، وكتل الأجار.
   ملاحظة: مطلوب 1 لتر من السائل الدماغي النخاعي الاصطناعي (ACSF) لكل تجربة. كما تم نشره سابقا ، يتم تحضير ACSF عن طريق إذابة المواد الكيميائية في H2O المقطر المزدوج. يتم تحضير محلول القطع عن طريق استكمال 200 مل من ACSF مع 0.87 مل من محلول مخزون 2 M MgSO₄.
2. أكسجين ACSF ومحلول القطع طوال التجربة مع 95٪ O₂ و 5٪ CO₂.
3. تخدير الفأر بعمق باستخدام جهاز تخدير حيواني صغير باستخدام الأيزوفلوران (3٪ أكسجين). تحقق من عمق التخدير باستخدام منعكس انسحاب الأطراف قبل المتابعة.
4. اقطع رأس الماوس باستخدام مقص كبير وقم بتبريد الرأس على الفور في محلول قطع مثلج.
5. افتح الجمجمة عن طريق شق واحد في خط الوسط من الذيلية إلى المنقارية وادفع برفق قطع من الجمجمة إلى الجانبين باستخدام الملقط. قم بإزالة الدماغ بسرعة عن طريق رفعه برفق من الجمجمة باستخدام ملعقة صغيرة مستديرة. قطع المخيخ بمشرط. ضع الدماغ في محلول تقطيع مثلج.
6. بالنسبة لمواقع حقن mPFC ، استخدم مشرطا لقطع الجزء الأمامي من الدماغ (يحتوي على mPFC) ووضعه في محلول تقطيع مثلج حتى التقطيع
.
7. قم بإزالة محلول القطع الزائد بورق الترشيح وألصق الجزء الخلفي من الدماغ على مرحلة الاهتزاز.
8. بالنسبة لشرائح اللوزة الإكليلية ، ومواقع حقن MGm / PIN ، ومواقع حقن mPFC ، قم بلصق الدماغ مباشرة على المسرح (الشكل 1D ، اليسار واليمين). ضع كتلة أجار إضافية خلف الدماغ لتحقيق الاستقرار أثناء التقطيع.
9. ضع المرحلة في حجرة التقطيع مع محلول قطع مؤكسج مثلج يتم الحفاظ عليه عند 4 درجات مئوية باستخدام وحدة التبريد. باستخدام شفرة الياقوت ، قم بإعداد شرائح إكليلية من اللوزة. ضع الشرائح في حجرة واجهة مزودة ب ACSF المؤكسج في RT.

النتائج

p class = "jove_content" fo: keep-together.within-page = "1" >
الشكل 1. الحقن التجسيمية ، وإعداد شرائح الدماغ الحادة ، وتصور الألياف قبل المشبكي. (أ ، ب) حقن الفيروسات التجسيمية. أ) صورة فأر مخدر يوضع في إطار تجسيمي مع كشوف الجمجمة وماصة الحقن. الداخلية: قم بتكبير صورة ماصة الحقن المملوءة بمحلول الفيروسات الممزوج باللون الأخضر السريع. شريط المقياس: 3 مم. (ب) تخطيطي لجمجمة الفأر مع مواضع محددة لثقوب الحفر لمناطق الحقن ...

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات السائل الدماغي النخاعي الاصطناعي (ACSF) للتكوين ، انظر المراجع # 16 و # 23 حلول التصحيح الداخلي للتكوين ، انظر المراجع # 16 و # 23 قطاعة، ميكروم HM650V فيشر ساينتفيك ، ألمانيا 920120 وحدة تبريد لتقطيع الأنسجة، CU65 فيشر ساينتفيك ، ألمانيا 770180 شفرة الياقوت سكاكين ديلاوير الماسية مجسم ، SZX2-RFA16 أوليمبوس ، اليابان