توليد شرائح قشرة الحمالة الأنسية الأنسية الأمامية من أدمغة الفئران

الملخص

المصدر: Lu, H., et al. تحفيز التيار المباشر وتسجيل مصفوفة متعددة الأقطاب الكهربائية للنشاط الشبيه بالنوبات في تحضير شريحة دماغ الفئران. J. Vis. Exp. (2016)

يوضح الفيديو تحضير شرائح القشرة الحزامية الأمامية المهاد الإنسي (MT-ACC) من أدمغة الفئران. يتم تشريح دماغ الفأر ، ويتم إجراء جروح لكشف مسار MT-ACC ، ويتم إنشاء الشرائح باستخدام اهتزاز. ثم يتم الحفاظ على شرائح MT-ACC في السائل الدماغي النخاعي الاصطناعي المؤكسج.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

< p class = "jove_title" >1. تحضير شريحة الدماغ

1. استخدم ذكور الفئران C57BL / 6J ، بعمر 4-8 أسابيع. إيواء في غرفة مكيفة (21-23 درجة مئوية ؛ رطوبة 50٪ ؛ دورة إضاءة / مظلمة 12 ساعة / 12 ساعة ، أضواء مضاءة في الساعة 8:00 صباحا) مع إمكانية الوصول المجاني إلى الطعام والماء.
2. خذ 250 مل من السائل الدماغي النخاعي الاصطناعي (aCSF) وضعه في دورق يحتوي على ثلج. في الوقت نفسه ، قم بتوفير الغاز المستمر الذي يتكون من 95٪ O₂ و 5٪ CO₂.
3. جراحة
   1. قم بتخدير بنسبة 4٪ من الأيزوفلوران في صندوق زجاجي لمدة 3 دقائق تقريبا. بمجرد أن يصل إلى عمق التخدير الجراحي (يشار إليه بعدم وجود استجابة لقرص إصبع القدم) ، ضعه على صينية ضحلة مملوءة بالثلج المجروش ، وقم بإزالة الرأس باستخدام المقص.
   2. كشف الجمجمة ، وتقليم العضلات المتبقية. بعد ذلك ، باستخدام rongeurs ، قم بإزالة السطح الظهري للجمجمة من الدماغ. قم بقص جوانب الجمجمة باستخدام rongeurs. تعقيم جميع الأدوات الجراحية بمحلول إيثانول بنسبة 75٪.
   3. باستخدام ملعقة ، قم بقطع البصيلات الشمية والوصلات العصبية على طول السطح البطني للدماغ ، وإزالة الدماغ. بعد قطع الرأس ، انقل الدماغ بسرعة إلى دورق مليء ب aCSF المؤكسج المثلج.
4. تحضير المشفى الإنسي (MT) - شريحة الدماغ للقشرة الحزامية الأمامية (ACC)
   ملاحظه: قم بإعداد الشرائح التي تحتوي على المسار من MT إلى ACC.
   1. قم بقص كتلة الدماغ يدويا بقطعتين سهمتين 2.0 مم جانبيا إلى خط الوسط في كل نصف كرة كرة لعرض التشريح تحت القشري. ثم قم بعمل قطعتين بزاوية. قم بعمل أول قطع متقاطع مواز للمسار الليفي المرئي في المخطط.
   2. قم بعمل القطع المتقاطع الثاني من الاتصال بين المخيخ والقشرة البصرية إلى نقطة المنتصف بين المسار الأمامي والقناة البصرية البطنية والموازية لمسار المهاد الحزامي.
   3. قم بتوصيل كتلة الدماغ بلوحة زاوية (~ 120 درجة) باستخدام مادة لاصقة cyanoacrylate وقم بعمل قطع فوق نقطة تحول المسار. افتح اللوحة ، وافردها ، وألصقها على مرحلة الغرفة من الاهتزاز.
   4. اصنع شرائح دماغ المهاد الإنسي ACC (بسمك 500 ميكرومتر) ثم اغمرها في aCSF المؤكسج المثلج. انقل الشرائح إلى غرفة التسجيل ، واحتفظ بها عند 32 درجة مئوية تحت التروية المستمرة (12 مل / دقيقة) مع aCSF المؤكسج لمدة 1 ساعة.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات مخدر: إيزوفلوران شركة منتجات الهالوكربون NDC 12164-002-25 4٪ aCSF (الإجمالي: 1 لتر): د (+) - الجلوكوز ميرك 1.08337.1000 10 ملم كربونات هيدروجين الصوديوم ميرك 1.06329.0500 25 ملم كلوريد الصوديوم ميرك 1.06404.1000 124 ملم (+) - الصوديوم L-ascorbate ، > = 98٪ سيغما أ 4034-100 جرام 0.15 جم / 2 سم مكعب كبريتات المغنيسيوم ، اللامائية ، ReagentPlus سيغما M7506-500G 2 مللي ثنائي هيدرات كلوريد الكالسيوم ميرك 1.02382.1000 2 مللي أحادي هيدرات فوسفات ثنائي هيدروجين الصوديوم ميرك 1.06346.1000 1 ملي متر كلوريد البوتاسيوم ماي آند بيكر المحدودة داجنهام إنجلترا MS 7616 4.4 ملي