مقالة منهجية

تحضير شرائح قشرة الأنف والحصين من دماغ جرو الفئران

يوليو 8, 2025

في هذه المقالة

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصدر: Valente ، C. A. ، et al. ، نموذج لتكوين الصرع في ثقافات الشرائح العضوية لقشرة الأنف والحصين. J. Vis. Exp. (2021)

يوضح الفيديو طريقة للحصول على شرائح قشرة الأنف والحصين من دماغ جرو الفئران وزراعتها في إدخالات غشائية داخل صفيحة متعددة الآبار مليئة بالوسائط لمزيد من التحليل.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على عينات حيوانية والموافقة عليها من قبل لجنة المراجعة الأخلاقية الحيوانية المناسبة.

فئة

1. تحضير شرائح قشرة الأنف والحصين

ملاحظة: يستخدم تحضير شرائح قشرة الأنف والحصين الفئران P6-7 Sprague-Dawley.

  1. إعداد الثقافة والإعداد الوسيط
    1. في اليوم السابق للثقافة ، قم بإعداد الوسائط المطلوبة ووضعها عند 4 درجات مئوية.
    2. تحضير وسط التشريح: 25 ملي مولار جلوكوز في محلول الملح المتوازن من جي (GBSS).
    3. تحضير وسط الاستزراع: 50٪ Opti-MEM ، 25٪ HBSS ، 25٪ مصل الحصان (HS) ، 25 ملي جلوكوز ، 30 ميكروغرام / مل جنتامايسين.
    4. تحضير وسط الصيانة: Neurobasal-A (NBA) ، 2٪ B27 ، 1 ملي مولار L-glutamine ، 30 ميكروغرام / مل جنتامايسين ، HS (15٪ ، 10٪ ، 5٪ و 0٪).
  2. حصاد الدماغ
    1. قبل بدء المزرعة مباشرة ، أضف 1.1 مل من وسط الاستزراع إلى كل بئر من الصفيحة المكونة من 6 آبار باستخدام ماصة P1000 وضعها عند 37 درجة مئوية.
    2. ضع جميع المعدات (مجهر التشريح ، مفرمة الأنسجة ، مصباح التشريح ، أدوات التشريح ، الأقطاب الكهربائية ، الألواح ، الإدخالات ، وأوراق الترشيح) داخل خزانة السلامة البيولوجية وتعقيمها تحت ضوء الأشعة فوق البنفسجية لمدة 15 دقيقة.
    3. اضبط سمك الشريحة إلى 350 ميكرومتر.
    4. اسحب GBSS من الثلاجة. أضف 5 مل من GBSS إلى ستة أطباق بتري. ستكون هناك حاجة إلى ستة أطباق بتري لكل.
    5. القتل الرحيم جرو الفئران. قم بقطع الرأس باستخدام مقص حاد في قاعدة جذع دماغ.
    6. اغسل رأس ثلاث مرات في GBSS البارد وخذه داخل خزانة الأمان.
  3. عزل الأنسجة وتحضير الشرائح
    1. أدخل ملقطا حادا بإحكام في تجويف العين لتثبيت الرأس.
    2. باستخدام مقص رفيع ، قم بقص الجلد / فروة الرأس على طول خط الوسط بدءا من الثقبة الفقرية باتجاه الفص الجبهي وضعه جانبا.
    3. قطع بنفس طريقة الجمجمة وعلى طول الشق المستعرض الدماغي (المسافة بين الدماغ والمخيخ). باستخدام ملقط طويل منحني ، حركه بعيدا عن بعضه البعض.
    4. تخلص من المصابيح الشمية بملعقة. أخرج الدماغ من الرأس وضعه في GBSS شديد البرودة مع توجيه السطح الظهري لأعلى (الشكل 1 أ).
    5. أدخل الملقط الدقيق في المخيخ واذهب على طول خط الوسط مع فتح الملعقة لكل نصف كرة بعناية فائقة (الشكل 1 ب).
    6. باستخدام ملقط منحنى قصير ، قم بإزالة الأنسجة الزائدة التي تغطي الحصين بعناية ، دون لمس بنية الحصين. ثم باستخدام ملعقة ، اقطع أسفل كل حصين (الشكل 1 ج).
    7. التقط نصف الكرة الأرضية وضعه ، مع توجيه الحصين لأعلى ، على ورق ترشيح. كرر الإجراء مع نصف الكرة الآخر وضعه بالتوازي مع النصف الأول ، في ورق الترشيح. ضع ورق الترشيح على مفرمة المناديل ، بحيث يكون نصفي الكرة الأرضية عموديا على الشفرة ، وقم بتقطيع نصفي الكرة الأرضية إلى شرائح 350 ميكرومتر (الشكل 1 د).
    8. ضع الأنسجة المقطعة في طبق بتري مع GBSS البارد (الشكل 1 ه).
    9. افصل الشرائح بعناية باستخدام أقطاب الطرف المستديرة (الشكل 1F). احتفظ فقط بالشرائح ذات قشرة الأنف والحصين السليمة هيكليا. يجب تحديد مناطق DG و CA بشكل مثالي ، وكذلك القشرة المخية الداخلية وحول الأنف (الشكل 1G).
    10. ضع كل شريحة على الملحق (الشكل 1H-I) ، باستخدام ملعقة وقطب كهربائي دائري. قم بإزالة وسط التشريح الزائد حول كل شريحة باستخدام ماصة P20 (الشكل 1J). يمكن استزراع أربع شرائح من قشرة الأنف والحصين في ملحق واحد (الشكل 1 ك).
  4. الحفاظ على الثقافة
    1. قم بتغيير الوسيط كل يومين.
    2. قم بتسخين الوسط عند 37 درجة مئوية.
    3. خذ الأطباق من الحاضنة. التقط كل ملحق عن طريق إمساك الحافة البلاستيكية بالملقط (الشكل 1L).
    4. استخدم يدا حرة لشفط الوسط من البئر. ضع الملحق مرة أخرى في البئر وأضف 1 مل ، باستخدام ماصة P1000 ، من وسط دافئ طازج (الشكل 1M). كرر لجميع الإدخالات. تأكد من عدم وجود فقاعات هواء محاصرة بين الغشاء والوسط.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

p class = "jove_content" fo: keep-together.within-page = "1" >figure-results-1
الشكل 1: إجراء مفصل لإعداد شرائح النمط العضوي لقشرة الأنف والحصين. (أ) أخرج الدماغ من الرأس وضعه في GBSS المثلج مع توجيه السطح الظهري لأعلى. (ب) أدخل الملقط في المخيخ. افتح الدماغ من خلال خط الوسط وقم بإزالة الأنسجة الزائدة فوق الحصين. (ج) بملعقة مقطوعة أسفل الحصين ، كما هو موضح في الأسهم. (د) ضع كلا الحصين متجهين لأعلى وم...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
لم يتم الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات شفرات لمقبض مشرط أدوات العلوم الدقيقة 10011-00 نظام غرفة شريحة الدماغ / الأنسجة وارنر إنسترومنتس إدخالات زراعة الخلايا ، 30 مم ، PTFE محبة للماء ميليبور ساس PICM03050 حاضنة تقليدية الحرارة العلمية هيريوس BB15 ، خط الوظائف اضبط على 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون D (+) - مونوهيدرات الجلوكوز ميرك ميليبور 1.08342.1000 D- (+) - محلول الجلوكوز ، 45٪ في الماء سيغما جي 8769 ثنائي الصوديوم فوسفات الهيدروجين ثنائي الهيدرات ميرك ميليبور 1.06580.1000 دومون # 5 ملقط ناعم بيولوجي إينوكس أدوات العلوم الدقيقة 11254-20 دومون # 5 ملقط قياسي إينوكس أدوات العلوم الدقيقة 11251-20 دومون # 7 ملقط قياسي دوموكسل أدوات العلوم الدقيقة 11271-30 ملقط دومون الطبي #7S منحنى قصير إينوكس أدوات العلوم الدقيقة 11273-22 محلول مخزون الجنتاميسين ، 50 مجم / مل ثيرمو فيشر العلمي 15750-037 محلول الملح المتوازن من جي (GBSS) الصناعات البيولوجية 01-919-1 أ أقطاب زجاجية منتجات علمية جي بي 150 إف -10 نصائح مستديرة محلية الصنع ماصات باستور زجاجية، 230 مم VWR الدولية 612-1702 مصل الحصان ، معطل بالحرارة (HS) ثيرمو فيشر العلمي هاتف: 26050-088 ملعقة القزحية منحنية أدوات العلوم الدقيقة 10092-12 خزانة السلامة البيولوجية من الفئة الثانية هيراسفي النظام المنسق 12 محلول L-Glutamine 200 ملي مولار (Q) ثيرمو فيشر العلمي 25030-024 Neurobasal-A متوسط (الدوري الاميركي للمحترفين) ثيرمو فيشر العلمي 10888-022 Opti-MEM® I مصل متوسط ثيرمو فيشر العلمي 31985-047 البلاتين 5 شفرات جيليت ورق ترشيح نوعي، سليلوز، صنف 1، 55 مم واتمان 1001-055 احتفاظ متوسط 11 ميكرومتر ورق ترشيح نوعي، سليلوز، درجة 1، 90 مم واتمان 1001-090 احتفاظ متوسط 11 ميكرومتر مقبض مشرط أدوات العلوم الدقيقة 91003-12 لوحات معقمة 6 آبار معالجة TC كورنينج CORN3516 تحكم درجة الحرارة شركة النظم الطبية تي سي -102 مفرمة المناديل شركة ميككل لهندسة مختبرات المحدودة. MTC/2 ضبط على 350 ميكرومتر

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

GBSS

مقالات ذات صلة