الشريان المساريقي تقلص والاسترخاء عن طريق الدراسات الآلي Myography أسلاك

ملخص

يوصف أسلوب myography الآلي لقياس القوة في الشرايين المساريقي معزولة. انها توظف Mulvany - هالبيرن Myograph سيارات أسلاك مزدوجة 510A لتحديد الاستجابات لفينيليفرين والكالسيوم خارج الخلية. الأسلوب يسمح تصميم ثابت من الاستجابات لمنبهات متساوي القياس في أوعية صغيرة من أقطارها من 6-30 ميكرون ، بشكل مستقل.

الملخص

الأوعية المقاومة القريبة ، مثل الشرايين المساريقي ، يسهم بشكل كبير في المقاومة الطرفية. هذه السفن الصغيرة ما بين 100-400 ميكرون في القطر وظيفة في المقام الأول في توجيه تدفق الدم إلى الأعضاء المختلفة وفقا لمتطلبات الكلية من الجسم. الشريان المساريقي الفئران التي يبلغ قطرها أكبر من 100 ميكرون. ويستند هذا الأسلوب myography ، وصف لأول مرة من قبل وMulvay هالبيرن ¹ ، على الطريقة التي اقترحها بيفان وأوشر ^2. هذه التقنية يوفر معلومات عن السفن الصغيرة في ظل ظروف متساوي القياس ، حيث يتم منع تقصير كبير من إعداد العضلات. منذ إنتاج القوة والحساسية من السفن لمنبهات مختلفة تعتمد على مدى تمتد ، وفقا لعلاقة التوتر طول النشط ، من الضروري إجراء دراسات في ظل ظروف الانكماش متساوي القياس للحيلولة دون الامتثال للأسلاك المتزايدة. ويفضل لأسلاك الفولاذ المقاوم للصدأ أسلاك التنجستين بسبب الأكسدة من هذا الأخير ، الذي يؤثر على ردود سجل ³ ، والأسلوب يسمح للمقارنة بين ناهض بفعل انكماش الأوعية منصة للحصول على أدلة عن وظيفة عادية من الأوعية الدموية على نحو سلس مستقبلات الخلايا العضلية.

لقد أظهرنا في العديد من الدراسات التي الشرايين المساريقي المعزولة التي يتم التعاقد عليها مع phenylyephrine الاسترخاء بالإضافة إلى تركيزات التراكمي من الكالسيوم خارج الخلية (كا ^{2 +} _ه). نتائج أدت بنا إلى الاستنتاج بأن الأعصاب المحيطة بالأوعية الحسية ، التي تعبر عن مجموعة البروتين يقترن كا ^{2 +} للاستشعار مستقبلات (السيارة) ، التوسط هذا الرد ارتخاء وعائي. باستخدام الأسلوب الآلي myography الأسلاك ، وتبين لنا هنا أن الشرايين المساريقي من يستار ، داهل الملح الحساسة (DS) ، والملح داهل المقاوم (DR) الفئران تستجيب لمختلف كا ^{2 +} _ه. وأظهرت الأنسجة من فئران ويستار أعلى كا ^{2 +} الحساسية مقارنة بالذين من الدكتور وDS. انخفاض التعبير سيارات في الشرايين المساريقي من الفئران DS يرتبط انخفاض الكالسيوم ^{2 +} _ه بفعل استرخاء الشرايين معزولة قبل التعاقد. وتشير البيانات إلى أن هناك حاجة للسيارات للاسترخاء الشرايين المساريقي تحت نغمة الأدرينالية المتزايدة ، كما يحدث في ارتفاع ضغط الدم ، وتشير إلى وجود عيب متأصل في مسار السيارة في إشارة الحيوانات داهل ، وهو أشد وطأة في DS.

يمكن أن الطريقة مفيدة في تحديد الأوعية الدموية المجراة سابقا التفاعل في الشرايين ومقاومة المساريقي مماثلة الأوعية الدموية الصغيرة ومقارنات بين منبهات مختلفة و / أو الخصوم بسهولة وباستمرار المقررة جنبا إلى جنب ^6،7،8.

البروتوكول

1. عزل الشريان المساريقي الفئران الصغيرة

1. تخدير الحيوانات مع isoflurane في غرفة مغلقة ومسح البطن مع الكحول.
2. تنفيذ خط منتصف البطن لفضح السرير المساريقي.
3. باستخدام مقص ، وإزالة حوالي 85 سم من الأمعاء مع الأوعية الدموية المغذية مع الشريان المساريقي العلوي. قطع نهاية المقطع القريب من الأمعاء على مقربة من بوابة المعدة ونهاية البعيدة بالقرب من تقاطع اللفائفي coecal. يتم عزل أجزاء من الأمعاء من الفئران التي تم تخدير عميق مع isoflurane والموت الرحيم بواسطة ثقب مفتوح الصدر في القلب.
4. وضعت المقطع رفعه في طبق بتري المغلفة التي تحتوي على جهاز الأمن الوقائي ، وتأدية تشريح الشريان المساريقي في درجة حرارة الغرفة.
5. دبوس باستمرار نهاية القريبة من الأمعاء على الجانب الأيمن ودبوس ما تبقى من اتجاه عكس اتجاه عقارب الساعة intestineina (النهاية ieproximal على الأوعية الدموية المغذية لليسار على الجانب الآخر من الأمعاء).
6. تشريح خارج الفرع الثاني والثالث مع شرائح قطعة من الجزء القريب.
7. تشريح خارج السياق وعزل الشريان (مع نقطة فرع على شكل حرف V) وتنظيفه من خلال إزالة الدهنية والنسيج الضام. تجنب الاتصال المباشر مع الشريان عن طريق سحب بلطف مع ملقط والقطع من خلال غشاء من النسيج الضام.

2. تصاعد السفينة

1. قطع جزأين قصيرة (≈ 4 سم) من 40 ميكرومتر التنغستن خالية من أسلاك الفولاذ المقاوم للصدأ ، وملقط مع غرامة ، وإدراج أحد في لمعة الشريان كل مع الحرص على عدم الاضرار البطانة. استخدام غيض سلك لفتح التجويف إذا لزم الأمر. الدماء تسيل من السفينة هو بادرة طيبة فتح التجويف.
2. ملء الغرفة myograph مع محلول ملحي الفسيولوجية (PSS ؛ ملي : 115 كلوريد الصوديوم ، 4.7 بوكل ، 1.4 0.7 MgSO ₄ H ₂ O ، 5 NaHCO ₃ ، 1.2 K ₂ هبو ₄ ، 1.1 نا ₂ هبو ₄ ، 1.0 CaCl _{2 و} 20 و HEPES 5 الجلوكوز ، ودرجة الحموضة 7.4) مع حمض الاسكوربيك (100 ميكرومتر) في 37 درجة مئوية ، واستخدام الملقط نقل بعناية الجزء السفينة مترابطة من طبق بتري في الغرفة في درجة حرارة الغرفة ونقل السفينة يستأصل الجزء الأقرب إلى الغرفة وسحب myograph نهاية على طول الأسلاك لإطعام عليه في السفينة. تجنب الضغط على السفينة.
3. آمن قرب نهاية السلك عكس اتجاه عقارب الساعة في إطار إصلاح المسمار القريب على الفك الأيمن متصلا ميكرون. قبض على نهاية خالية من الأسلاك مع ملقط وثبته في اتجاه عقارب الساعة في إطار إصلاح المسمار حتى على الفك الأيمن. تأكد من أن يقع في الجزء سفينة على طول السلك في الفجوة بين فكي دون إجراء أي اتصال مع الفك نفسها.
4. المسمار بين فكي إربا ، ومحاذاة خط السلك الثاني مع السفينة وأدخله في نهاية بكثير من التجويف. تغذية السلك بلطف من خلال تجويف الجزء السفينة في اقتراح واحد باستخدام السلك شنت بالفعل كدليل. عقد السلك حوالي 1 سم من السفينة لتجنب الضغط عليه أثناء المناورة ، وتجنب لمس البطانة.
5. المسمار بين فكي معا وضمان الثانية سلك تصاعد التحركات تحت الاول المضمون على الفك الأيمن.
6. آمن قرب نهاية السلك الثاني في اتجاه عقارب الساعة في إطار إصلاح المسمار بالقرب من الفك الأيمن متصلا محول.
7. تأمين نهاية بكثير من الأسلاك تحت المسمار على تثبيت الفك الأيمن وتشديد لتمديد الأسلاك.
8. بمجرد اكتمال التركيب ، إعادة تعيين السيارات في "القائمة التركيب" والبدء في تطبيع السفينة.

3. تطبيع

وMyograph سيارات أسلاك مزدوجة منظومة 510A لديه وظيفة التطبيع الآلي ، والتي يتم تقييمها من القائمة "التطبيع" ويسمح امتدت السفينة إلى محيط داخلي تطبيع بواسطة إجراءات موحدة وفقا لبروتوكول الشركة المصنعة بعد موازنة لمدة 30 دقيقة في 37 درجة مئوية. ثم يتم تركيب منحنى أسي لبيانات محيط الضغوط الداخلية. الإجراء يحدد قطر التجويف (د 100) أن الشريان كان سيؤثر في الجسم الحي عند استرخاء وتحت ضغط من 100 ملم زئبقي بطريق الجدار ¹ المعلمات للتطبيع الشريان المساريقي الفئران هي كما يلي :

1. الضغط هدفا بطريق الجدار = 13،3 كيلو باسكال (100 ملم زئبق).
2. الوقت = 60 ثانية ؛ مدة كل خطوة من خطوات التطبيع.
3. IC ₁ / ₁₀₀ = 0.9 IC (IC ₁ = محيط الداخلية تطبيع ، IC ₁₀₀ = محيط الداخلية المقابلة للضغط على الهدف.
4. المعايرة العدسة 2 * Δ (مم / العين القسمة) ، 2 دلتا لأسباب البرمجة.

قياس طول الشريان المساريقي شنت باستخدام مجهر العين قطعة قراءات عندما hairlines أكثر من الغايات البعيدة والقريبة من السفينة التي شنت SEGMالأنف والحنجرة. لفترة وجيزة ، ويتم قياس طول السفينة التي شنت في الجزء الأقصى التكبير مع العين بالعين معايرة قطعة في مجهر تشريح. تقاس القراءة العين قطعة مع خط الشعر أكثر بكثير من نهاية الجزء (أ ₁₎ وبالقرب من نهاية الجزء (أ ₂₎ في شعب العين وتسجيلها. هذه القيم ، مع قراءات ميكرومتر ، تسجل قبل وبعد تمتد السفينة وإدخالها في القوائم لبرنامج لحساب منحنى تركيبها وقطرها الداخلي المقابلة لضغوط تستهدف بطريق الجدار من 100 ملم زئبق

في دراستنا ، كانت مجموعة الشرايين إلى القطر من التجويف د ₁ = 0.9 XD ₁₀₀ ، حيث نشط تطوير القوة القصوى. ويعتبر تطوير القوة النشطة من ≥ 10 مليون جرذ في الشرايين المساريقي الأمثل للتجارب والمضي قدما. تم تجاهل الأنسجة مع قوة أقل نشاطا.

4. قياس الاستجابات

بعد التطبيع ، هي الخصائص الميكانيكية والفنية للسفن إعادة تفعيلها من خلال تنفيذ "بداية القياسية" ، الذي ينطوي على التحدي السفن المتكررة مع تطبيقات (2 أو 3 في العادة) من 5 ميكرومتر فينيليفرين (PE) للحصول انكماش استنساخه. نموذجي "بداية القياسية" في مختبرنا ويتكون من سلسلة من التحفيز وفترات انخفاضه على النحو التالي :

1. myograph استبدال الغطاء وتبدأ الغرفة التهوية مع الهواء بنسبة 95 ٪ و 5 ٪ CO _2.
2. ملء الغرفة مع PSS الطازجة (التي تحتوي على 100 حمض الاسكوربيك ميكرومتر)
3. سفينة عقدا مع المؤسسة العامة 5 ميكرومتر لمدة 5 دقائق وتغسل 4 مرات مع العازلة PSS.
4. بعد غسل الماضي ، حجرة الملء مع جهاز الأمن الوقائي وانتظر 3 دقائق قبل تكرار الخطوات (ب) و (ج)

بعد بدء القياسية ، الشريان مستعد لهذه التجربة. ويتم تقييم الارخاء من السفن علاوة على ذلك تعاقدت التراكمي لزيادة تركيزات CaCl ₂ (0.5 -- 4 ملم). والسفن عندما تستخدم مثبطات مسبقا المحتضنة مع المركبات في غرفة لمدة 20 دقيقة myograph وحاضرا أثناء المقايسات.

5. تحليل البيانات

وقد حلل "تطبيع" بيانات لاقتفاء أثر السفن والقوة ، وتحويلها مباشرة إلى بيانات نصية ، مع الرسوم البيانية برنامج SigmaPlot 11.0 (Systat البرمجيات ، نقطة ريتشموند ، كاليفورنيا) وخططوا كما هو مبين في الشكل 1. وقد تم تحليل البيانات تركيز على الاستجابة ، وتحسب من اقتفاء أثر ، عن طريق تحديد القيم EC ₅₀ من البيانات التجريبية تركيبها على وظيفة لوجستية أربعة المعلمة في القائمة الصيدلة من البرنامج. وأجريت مقارنات بين الجماعات وداخل الجماعات من قبل تحليل طريقة واحدة من الفرق (ANOVA) ، والخلافات مع 0،05 تعتبر كبيرة.

6. ممثل النتائج :

المعلمات	ويستار	داهل الملح الحساسة	داهل سولت المقاوم
L 100 (ميكرون)	83.26 ± 2.33	91.52 ± 4.67	117.45 ± 8.43 *
X 1	604.21 ± 41.97	752.24 ± 85.25	745.84 ± 110.09
ص 2	0.99 ± 0.003	0.97 ± 0.008	0.97 ± 0.007

* الفرق بين القيم ₁₀₀ لتر للويستار DR ذات دلالة إحصائية. شابيرو ، يلك تجارب مرت الحياة الطبيعية (ع = 0.588) ؛ تكافؤ تجارب مرت الفرق (ع = 0.237).

L ₁₀₀ = القطر الداخلي للجزء منصة المناظرة للضغط الهدف بطريق الجدار.

X ₁ = الإعداد ميضعة الدقيقة المطلوبة لتمدد الأوعية شنت على محيطها الداخلي تطبيع (أي قيمة في القراءة ميكرومتر التي أجريت فيها التجارب).

ص ² = معامل الانحدار للنوبة (X _ط ، _ط ص) إلى منحنى أسي.

ملاحظة : تم وصف هذا الإجراء بالتفصيل في دليل لنظام Myograph 510A ^6.

الجدول 1. نموذج للقراءة نفاد المعلمات التطبيع الشريان المساريقي لشرائح من يستار ، DS و DR من البرنامج الأساسي هو موضح في "القائمة تطبيع". القيم هي وسيلة (± SEM) من 5 الحيوانات. * الفروق بين القيم ₁₀₀ لتر للويستار DS ذات دلالة إحصائية (P <0.05).

ويستار	DS	DR
14.2 ± 0.6		20.9 ± 1.3 *

الجدول 2. التوترات نموا (MN) في الشرايين المساريقي معزولة عن يستار ، DS والجرذان DR ، بعد طلبات من 5 ميكرومتر PE كل سفينة. وذكرت وسائل القيم (± SEM) من 6-8 الحيوانات. * تختلف كثيرا عن الضوابط ويستار (ع <0.05).

الشكل 1. كا ^{2 +} _ه شنت بفعل الاسترخاء من الشريان المساريقي PE - التعاقد من الفئران ويستار في myograph الأسلاك في محلول الملح الفسيولوجية التي تحتوي على 1 ملم كا ^{2 +.} الشريان ومعايرتها لمدة 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية مع تهوية مستمرة والردود على كا ^{2 +} _ه تحديدها. ويرد ممثل القوة التتبع على إضافة 5 ميكرومتر PE تليها إضافات تراكمية كا ^{2 +.}

الشكل 2. كا ^{2 +} _ه شنت بفعل الاسترخاء من الشريان المساريقي PE - التعاقد من الفئران DS في myograph الأسلاك في محلول الملح الفسيولوجية التي تحتوي على 1 ملم كا ^{2 +.} الشريان ومعايرتها لمدة 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية مع تهوية مستمرة والردود على كا ^{2 +} _ه تحديدها. ويرد ممثل القوة التتبع على إضافة 5 ميكرومتر PE تليها إضافات تراكمية كا ^{2 +.} كاليفورنيا ⁽²⁾ وخطر شديد ⁺ الاسترخاء في هذا النسيج مقارنة بالذين من فئران ويستار وDR.

الشكل 3. كا ^{2 +} _ه شنت _بفعل الاسترخاء من الشريان المساريقي PE - التعاقد من الفئران DR myograph في سلك في محلول ملحي الفسيولوجية التي تحتوي على 1 ملم كا ^{2 +.} يظهر الشريان ومعايرتها لمدة 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية مع تهوية مستمرة والردود على كا ^{2 +} _ه قوة ممثل determined.A التتبع على إضافة 5 ميكرومتر PE تليها إضافات تراكمية كا ^{2 +.}

الشكل 4. A. [كا ^{2 +]} _البريد استجابة المنحنيات. باء الرسم البياني يظهر شريط EC ₅₀ للاسترخاء القيم التي يحددها تركيب البيانات للتعبير المعلمة four curve.C.CaR لوجستية في أروقة المساريقي معزولة عن الفئران والدكتور س.

المناقشة

ارتفاع ضغط الدم هو السبب الرئيسي لأمراض القلب والأوعية الدموية ، الدماغ والكلى / وفيات. حدوث ارتفاع ضغط الدم مرتفعة في عدد السكان والملح تراعي ارتفاع ضغط الدم مرتفع بشكل خاص في شيخوخة السكان ، وأكثر انتشارا بين السود من البيض. ويعتقد أن هذا نتيجة لميل من السود للاحتفاظ الصوديوم في كلاهم ^9. الملح الحساسية هو عامل رئيسي يساهم في أمراض الكلى ويترافق مع اختلال وظيفي البطانية ، ولكن لم يتم فهم الآلية بشكل كامل. وقد كشفت الدراسات التي أجريت مؤخرا في مختبرنا أن الوجبات الغذائي...

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
اسم المعدات / كاشف	شركة	فهرس العدد	تعليقات (اختياري)
Myograph السيارات أسلاك مزدوجة - 510A نظام الرادار والولايات المتحدة الأمريكية ، وشركة	أتلانتا ، الجا.	100151
PowerLab/4SP اقتناء نظام البيانات	ADInstruments ، كولورادو سبرينغز ، CO.	ML750	نماذج جديدة مع قنوات الإدخال 16/04 متوفرة.
ديل XPS البعد الجنرال 4 الكمبيوتر	ديل
Stemi SV الثاني (آبو) مع مجهر تشريح العين	كارل زايس الدولية.
ويستار ، داهل الملح الحساسة ، داهل الملح مقاومة الفئران	هارلان سبراغ داولي ، انديانابوليس ، في.
طعام القوارض	هارلاند Tekland ، ماديسون ، ويسكونسن.
فينيليفرين	سيغما الدريخ ، وسانت لويس ، MO.
غيرها من المواد الكيميائية			وكانت جميع المواد المستخدمة من أنقى درجات متاحة تجاريا.