$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.
< ص الفئة = "jove_title" >
1. التخدير والجراحة على
- قم بوزن الفأر وتخديره باستخدام نظام التخدير المعتمد من لجنة رعاية المحلية.
- قم بإجراء قرصة الذيل أو إصبع القدم بالملقط لتأكيد التخدير العميق قبل الجراحة.
- ضع الماوس في جهاز تجسيمي وقم بإصلاح رأسه.
- ضعي مرهم العين على كلتا العينين للحفاظ على رطوبتهما. اتبع إرشادات رعاية المحلية الخاصة بك فيما يتعلق بالتسكين قبل وبعد الجراحة.
- احلق الشعر باستخدام مقصات الجراحة. قم بعمل شق صغير (12-15 مم) في منتصف المنطقة الجراحية المكشوفة بالمقص. باستخدام الملقط ، اسحب فروة الرأس برفق بعيدا عن خط الوسط.
- افصل الجلد برفق وقم بإزالة الأنسجة المتبقية. نظف الجمجمة باستخدام براعم قطنية مطلية ببيروكسيد الهيدروجين.
- قم بحفر فتحتين صغيرتين بنصف قطر 1.0-1.5 مم على كلا الجانبين الأيسر والأيمن للجمجمة للسماح بإدخال الأقطاب الكهربائية الدقيقة للتسجيل في مناطق M2 تحت مجهر مجسمة (الشكل 1 أ).
ملاحظه: المواقع التجسيمية للثنائي M2: 1.94 مم أمام البرجما ، و 1.0 مم جانبي إلى خط الوسط ، و 0.8-1.1 مم بطني للجافية.
- قم بإزالة الأم الجافية بعناية بإبرة التنغستن.
- اسحب الماصات الدقيقة الزجاجية (القطر الخارجي: 1.0 مم) كأقطاب كهربائية دقيقة للتسجيل بمقاومة 1-2 MΩ.
- أدخل قطبين صغيرين منفصلين للتسجيل مملوءين ب 0.5 M كلوريد الصوديوم في الثقوب باستخدام معالجات دقيقة ميكانيكية (عند 60 درجة ، الشكل 1 ب).
2. تسجيلات LFP في M2 الثنائي للفئران
- قم بخفض الأقطاب الزجاجية اليمنى واليسرى ببطء في الإحداثيات المناسبة ل M2 الثنائية (الشكل 1C).
- لمراقبة الجودة ، اختبر مقاومة كل قطب كهربائي باستخدام مكبر الصوت التفاضلي قبل التقاط LFPs.
- اضبط عملية التسجيل على 0.1 هرتز وتمرير منخفض 1,000 هرتز مع تضخيم 1,000 ضعف.
- اجمع بيانات LFP الخام الرقمية لما لا يقل عن 60 ثانية من الأنشطة العفوية في حالة مستقرة ، مع تنفس الفئران بالتساوي بمعدل تنفس يبلغ 2 نفسا في الثانية تحت التخدير.
- بعد التسجيل ، ارفع الأقطاب الكهربائية ببطء خارج الدماغ ، ثم قتل الفئران عن طريق خلع عنق الرحم السريع.
- احفظ البيانات وقم بتحليلها دون اتصال.
