Method Article

تقييم استيعاب البروتينات السطحية المستهدفة باستخدام مشتق البيوتين

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
< p class = "jove_content" >المصدر: Tham، D.K.L.، وآخرون ، تحديد التعبير عن سطح الخلية ومعدل الخلايا الداخلية للبروتينات في مزارع الخلايا النجمية الأولية باستخدام البيوتينيل. J. Vis. إكسب. (2017).

يوضح هذا الفيديو طريقة لتقييم استيعاب البروتين المستهدف في الخلايا النجمية القشرية للفأر باستخدام البيوتينيل ، متبوعا بتحلل الخلية ، واستخراج البروتين القائم على الستربتافيدين ، والتمسخ ، وتحليل اللطخة الغربية لتأكيد الاستيعاب الناجح.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على عينات حيوانية والموافقة عليها من قبل لجنة المراجعة الأخلاقية الحيوانية المناسبة.

< p class = "jove_title" >1. تحديد معدل استيعاب بروتينات سطح الخلية في الخلايا النجمية عن طريق البيوتينيل

ملاحظة: في ما يلي ، نصف تجربة بيوتينيل نموذجية لمطاردة النبض تستخدم في هذه الحالة لتتبع الالتقام الخلوي ل AQP4 في الخلايا النجمية. تشمل المواد المتخصصة المطلوبة السلفو-NHS-SS-البيوتين ، وراتنج الستربتافيدين - أغاروز ، والجلوتاثيون المختزل ، واليودوأسيتاميد (انظر جدول المواد).

  1. قم بإعداد مزارع الخلايا النجمية القشرية للفأر في أطباق 60 مم باستخدا....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
لم يتم الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

Materials

List of materials used in this article Name Company Catalog Number Comments ألبومين مصل الأبقار سيجما ألدريتش أ 9647-50 بروموفينول الأزرق بيو راد #1610404 كوكتيل كامل مثبط البروتياز سيجما ألدريتش 11697498001 ثنائي الصوديوم إيثيلين ديامين تترا أسيتات ثنائي هيدرات (EDTA) بيو راد #1610729 ديثيوثريتول (DTT) بيو راد #1610611 وسط النسر المعدل من Dulbecco (DMEM) جيبكو / ثيرمو فيشر العلمي 11960-044 EZ-لينك سلفو-NHS-SS-البيوتين ثيرمو فيشر العلمي #21331 مصل الأبقار الجنينية جيبكو / ثيرمو فيشر العلمي 16000-044 الجلسرين فيشر ساينتيك بي ت 229-1 جلايسين سيجما ألدريتش جي 8898 يودوأسيتاميد بيو راد # 163-2109 ل-جلوتامين جيبكو / ثيرمو فيشر العلمي هاتف: 25030-081 البنسلين / الستربتومايسين جيبكو / ثيرمو فيشر العلمي 15140-122 بيروكسيداز أفينيالماعز النقي المضاد للأرانب IgG (H + L) مختبرات جاكسون للأبحاث المناعية 111-035-045 محلول ملحي عازل للفوسفات جيبكو / ثيرمو فيشر العلمي 10010-023 انخفاض الجلوتاثيون سيجما ألدريتش جي 6529 كلوريد الصوديوم (كلوريد الصوديوم) فيشر ساينتيك S271-500 كبريتات دوديسيل الصوديوم (SDS) سيجما ألدريتش 862010 هيدروكسيد الصوديوم (NaOH) فيشر ساينتيك S318-100 راتنج ستربتافيدين أغاروز ثيرمو فيشر العلمي #20347 الأرانب متعدد النسيلة المضادة ل AQP4 الأجسام المضادة ألومون AQP-004 قاعدة تريس (قاعدة تريزما) فيشر ساينتيك ص ب 152-1 تريس حمض الهيدروكلوريك فيشر ساينتيك BP153-1 تريتون X-100 فيشر ساينتيك بي بي 151-500

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Protein InternalizationBiotinylation AssayCell Surface ProteinsStreptavidin PurificationWestern Blot AnalysisAstrocyte CulturesCleavable BiotinReducing Agent TreatmentStreptavidin AgaroseGel Electrophoresis

Related Articles