القياس الكمي للأكتين الخيطي في الخلايا العصبية القشرية للفئران

الملخص

المصدر: Li, H., et al. القياس الكمي للأكتين الخيطي (F-actin) Puncta في الخلايا العصبية القشرية للفئران. J. Vis. Exp. (2016)

يوضح هذا الفيديو إجراء تلطيخ الخلايا العصبية القشرية للفئران بالفلورسنت للفحص المجهري. يستهدف البروتينات F-actin والبروتينات المتغصنة لتحليل السلامة الهيكلية وحساب كثافة F-actin ، وهو أمر بالغ الأهمية لدراسة وظيفة الخلايا العصبية وصحتها.

البروتوكول

فئة

1. وضع العلامات الفلورية والكيمياء المناعية

< p class = "jove_content" >ملاحظة: تم إجراء وضع العلامات على الفلورسنت المناعي لمزارع الخلايا القشرية الأولية في أطباق زراعة الخلايا ذات القاع الزجاجي مقاس 35 مم بحجم عمل 1 مل.

1. اغسل الطبق ذو القاع الزجاجي مرتين باستخدام محلول ملحي مخزن بالفوسفات درجة الحموضة 7.4 (PBS).
2. قم بإصلاح الخلايا التي تحتوي على 4٪ بارافورمالدهايد لمدة 15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة (RT).
3. اغسل الخلايا مرتين باستخدام PBS وتخلل 0.1٪ Triton X-100 في PBS لمدة 5 دقائق.
4. عالج الخلايا لمدة 20 دقيقة في RT ببقعة F (خيطية) خاصة بالأكتين ، AlexaFluor 488 Phalloidin (1:40 ، 25 ميكرولتر....

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات 35 مم صحون قاع زجاجي رقم 1.5 غطاء زجاجي شركة ماتتك P35G-1.5-20-C DMEM / F12 متوسط تقنيات الحياة هاتف: 10565-018 بولي L-يسين سيغما ص 9155 بارافورمالدهيد سيغما ص 6148 أليكسا فلور 488 فالودين تقنيات الحياة أ 12379 مصل الحصان العادي تقنيات الحياة هاتف: 26050-070 دجاج متعدد النسيلة مضاد ل MAP2 أبكام أب92434 Alexa Red 594 الماعز المترافق مضاد للدجاج IgG تقنيات الحياة أ 11042 NucBlue Live cell stain ReadyProbes Reagent Hoescht 33342 تقنيات الحياة R37605 حزمة برامج NIS-Elements نيكون إنسترومنتستر نيكون Eclipse TE2000-E مجهر فلوري مقلوب يتم التحكم فيه بواسطة الكمبيوتر نيكون إنسترومنتستر