تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.
< p class = "jove_title" >
1.
- استخدم ذكور وإناث الفئران بعمر 3 أشهر في هذه الدراسة.
- احتفظ بالحيوانات في دورة إضاءة / مظلمة مدتها 12 ساعة مع حرية الوصول إلى الطعام والماء.
< p class = "jove_title" >
2. تحضير كوكتيل KAX (الكيتامين + الزيلازين + الأسيبرومازين) للتخدير الحيواني
- قم بإذابة 50 مجم من الزيلازين (20 ملغ/مل) في 5 مل من الكيتامين (100 ملغ/مل) مع 1 مل من الأسيبرومازين (10 ملغ/مل) و3 مل من الماء المقطر. تخلط جيدا.
- قم بتعقيمها بفلتر حقنة وقم بتخزين هذا المحلول في زجاجة مصل سعة 10 مل.
فئة < p = "jove_title" >
3. حقن KAX
- قم بوزن (جم) والعودة إلى القفص حتى يصبح جاهزا للحقن.
- حقن 0.1 مل KAX / 100 جم من وزن جسم داخل الصفاق ، باستخدام حقنة أنسولين 1 مل بإبرة 28 جرام.
- اسمح للحيوان أن يصبح فاقدا للوعي. تحقق من ردود الفعل عن طريق الضغط على القدمين والذيل.
- احتفظ بجميع بأمان في المختبر طوال مدة الجراحة.
- بعد الجراحة ، استبدل في أقفاصها وحافظ على الراحة في درجة حرارة الغرفة (RT) حتى استعادة الوعي. أعد إلى منشأة فقط عندما تستيقظ وتستأنف السلوك الطبيعي.
فئة
4. التحضير للجراحة وتجميع الإبرة الدقيقة
- اصنع محلول كلوريد الصوديوم المعقم 2 م.
- استخدم مجتذب قطب كهربائي دقيق (الشكل 1 ج) لسحب أنبوب بورسليكات قياسي مصقول ثقيل بقطر داخلي 0.86 مم وأنبوب بورسليكات رقيق الجدران إلى إبرتين زجاجيتين مدببتين بدقة (الشكل 1 د ، الشكل 1 ه).
- قم بإعادة ملء إبرة دقيقة واحدة من الخطوة السابقة بمحلول ملحي 2 M باستخدام إبرة حقنة ردم وحقنة 1 مل (الشكل 1 ب). اضغط على فقاعات الهواء من طرف القطب.
- املأ حقنة ثانية سعة 1 مل ب 2 M كلوريد الصوديوم. قم بتوصيل إبرة 18 جم ثم قم بإرفاق طول (حوالي 10 بوصات) من أنابيب البولي إيثيلين (الشكل 1 أ). استخدم مكبس المحقنة لملء أنبوب البولي إيثيلين بالمحلول الملحي من خلال الإبرة.
- عندما تمتلئ كل من الإبرة الدقيقة والأنبوب بالمحلول الملحي ، قم بتوصيل الاثنين بعناية. تخلص من أي هواء في الاتصال بينهما (الشكل 2).
- شطبة طرف الإبرة الدقيقة بدقة عن طريق كشطها برفق شديد على حبيبات منشفة ورقية للدورة.
- تحقق من مقاومة الإبرة الدقيقة عن طريق دفع المكبس برفق على المحقنة حتى يمكن رؤية تيار ناعم من السائل على المنشفة الورقية. يجب ألا يزيد تيار السائل عن 0.5 مم.
< ص الفئة = "jove_title" >
5. تحضير
- ضع 1-2 قطرة مخدر موضعي على القرنية (محلول العيون بروباراكايين هيدروكلوريد ، USP ، 0.5٪). انتظر حتى لا يحدث رد فعل العين.
- تقليم الشعيرات بالمقص.
- تشبع قضيب طرف قطني بمحلول البيتادين ومنطقة المسحة حول العين التجريبية.
- باستخدام المجهر ، قم بتوصيل مرقئ لتثبيت الجفن السفلي لانتفاخ العين وفضح الوريد الصلبي وتقييد حركة العين. (الشكل 3 ، رأس السهم)
< p class = "jove_title" >
6. حقن المحلول الملحي المحفز للجلوكوما
- عندما يتم تحضير مجموعة الإبرة الدقيقة ، ابدأ الحقن.
- عندما يتم التأكد من أن لا يستجيب لقرص القدمين / الذيل ، اخترق الوريد الإسقفي بعناية بالإبرة الدقيقة عن طريق القدوم بزاوية منخفضة بين 10 و 20 درجة إلى الوريد (الشكل 3 ، السهم الأبيض). يظهر ثقب ناجح في الوريد عندما يدخل الدم إلى طرف الإبرة الدقيقة (الشكل 3 ، السهم الأسود).
قم - بحقن ما يقرب من 50 ميكرولتر من المحلول الملحي في الوريد ببطء ويدويا. يجب أن يستغرق هذا حوالي 10 ثوان. سوف تبيض الأوردة باللون الأبيض أثناء دوران الملح عبر الأوعية الدموية (الشكل 4 ، رأس السهم). قد تحافظ بعض المناطق على مظهر أحمر الدم (الشكل 4 ، السهم).
- قم بإجراء حقنة ثانية في الوريد ، مقابل موقع الأول ، لضمان تلف الشبكية الشامل لطبقة الخلايا العقدية الشبكية الكاملة.
ملاحظة: في غضون دقائق ، يجب أن يرى المرء مظهرا غائما مميزا من خلال قزحية العين حيث يدور الملح عبر نظام الأوعية الدموية.
- اترك العين المقابلة دون علاج لاستخدامها كعنصر تحكم داخلي.
