حقن داخل المخ البطيني لتحليل توزيع الفيروس المضخم للخلايا في دماغ الفأر حديثي الولادة

الملخص

المصدر: Kawasaki، H.، et al. الحقن داخل المخ البطيني وداخل الأوعية الدموية للجزيئات الفيروسية والحبيبات الدقيقة الفلورية في دماغ حديثي الولادة. J. Vis. إكسب. (2016).

يوضح هذا الفيديو عملية الحقن داخل المخ البطيني لدراسة توزيع الفيروس المضخم للخلايا الفئران (MCMV) في دماغ الفأر حديثي الولادة. يتم حقن MCMV ، المصمم للتعبير عن بروتين فلورسنت أخضر محسن (EGFP) للرؤية ، في البطين الجانبي لدماغ جرو الفأر. يدور الفيروس المحقون عبر السائل النخاعي ، ويصيب الخلايا في المنطقة حول البطينين ، بما في ذلك المنطقة الهامشية والضفيرة المشيمية والمنطقة تحت البطينية.

البروتوكول

فئة

1. حقن القيمة المحلية المضافة ل MCMV والميكروبيدات الفلورية في الفئران حديثي الولادة

1. الحفاظ على الفئران الحامل العادية ICR في منشأة يتم التحكم في درجة حرارتها تحت دورة ضوء/ظلام مدتها 12 ساعة. يتم تحديد الأطفال حديثي الولادة على أنهم P 0.5 في يوم الولادة.
2. عقم حقنة سعة 10 ميكرولتر وإبرة 27 جم مع 70٪ كحول.
3. قم بتحميل محلول الحقن (5 ميكرولتر) الذي يحتوي على MCMV أو ميكروبيدات الفلورسنت في الإبرة عن طريق سحب مكبس المحقنة بعناية.
4. كبح جماح الفأر حديثي الولادة (P 0.5) عن طريق وضع الفأر على الجليد لمدة 3 - 4 دقائق. بمجرد أن يخضع للتخدير ، استخدم طريقة استجابة قرص إصبع القدم لتحديد عمق التخدير.
5. وضع علامة على موقع الحقن بقلم مختبر غير سام في مكان حوالي 0.7 - 1.0 مم جانبي للخياطة السهمية و 0.7 - 1.0 مم الذيلية من بريجما حديثي الولادة (الشكل 1 أ).
6. أدخل الإبرة بعمق 2 مم ، عموديا على سطح الجمجمة في موقع الحقن المحدد. كمرجع ، ضع علامة 2 مم من طرف الإبرة باستخدام صانع غير سام.
قم
7. بحقن 5 ميكرولتر من MCMV ببطء (حوالي 5 × 10⁵ PFU) في البطين الجانبي دون فتح فروة الرأس (الشكل 1 ب).
8. في مجموعة أخرى من الفئران ، قم بحقن محلول 5 ميكرولتر يحتوي على ميكروبيدات فلورية (0.1 - 0.3 ميكرومتر ، حوالي 5.75 × 10⁸ جسيمات) بنفس الطريقة.
9. قم بإزالة الإبرة ببطء بعد 10 - 20 ثانية من إيقاف حركة المكبس لمنع التدفق العكسي.
10. للتعافي ، احتفظ بالفئران لمدة 5-10 دقائق في وعاء دافئ حتى تتم استعادة الحركة والاستجابة العامة.
11. حصاد الأدمغة في مجموعة من النقاط الزمنية (3 و 12 و 24 و 48 و 72 ساعة) بعد الحقن.

النتائج

p class = "jove_content" fo: keep-together.within-page = "1" >
الشكل 1: مواقع حقن الفأر حديثي الولادة. (أ ، ب) حقن القيمة المحلية المضافة بمقدار 5 ميكرولتر MCMV (حوالي 5 × 10⁵ PFU) أو 5 ميكروبيدات (حوالي 5.75 × 10⁹ جزيئات). (أ) يكون موقع الحقن عند نقطة المنتصف بين الأذن والعين (في موضع حوالي 0.7 - 1.0 مم جانبيا للخياطة السهمية و0.7 - 1.0 مم ذيلية من النخيط الوليدي). (ب) تستخدم إبرة 27 جم مع حقنة ...

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات SPHERO TM بوليسترين فلورسنت نيل أحمر 0.04-0.06 شركة Spherotech، Inc. FP-00556-2 SPHERO TM بوليسترين فلوري النيل الأحمر 0.1-0.3 شركة Spherotech، Inc. FP-0256-2 SPHERO TM بوليسترين فلوري النيل الأحمر 1.7-2.2 Spherotech، Inc. FP-2056-2 مصل فأر 10٪ داكو X0910 C57BL / 6 الماوس شركة SLC، Inc. ماوس ICR شركة SLC، Inc. محاقن ميكرولتر معدلة (سلسلة 7000) شركة هاميلتون إبرة قياس 35 سايتو الطبية متجه pEGFP-N1 كلونتك # 6085-1