توليد التهاب الدماغ والنخاع المناعي الذاتي التجريبي في نموذج الفأر

Abstract

المصدر: Tietz، S. M. et al. تصور ضعف الحواجز البطانية والدبقية لوحدة الأوعية الدموية العصبية أثناء التهاب الدماغ والنخاع المناعي الذاتي التجريبي في الجسم الحي. (2019)

يوضح هذا الفيديو طريقة إحداث التهاب الدماغ والنخاع المناعي الذاتي التجريبي (EAE) عن طريق حقن الببتيدات المشتقة من المايلين بمادة مساعدة لتنشيط الخلايا التائية ذاتية التفاعل ، والتي تهاجر إلى الدماغ. يتم إعطاء سم السعال الديكي لزيادة نفاذية الحاجز الدموي الدماغي ، مما يسمح لهذه الخلايا التائية والخلايا المناعية الأخرى بدخول الدماغ. تسبب هذه الخلايا المناعية إزالة الميالين ، مما يؤدي إلى ضعف انتقال الأعصاب وتطور EAE.

Protocol

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

فئة

1. تحريض EAE

1. تخدير الفئران C57BL / 6 باستخدام الأيزوفلوران باستخدام نظام المبخر. للحث على التخدير في الفئران ، قم بتعريض الفأر ل 4.5٪ من الأيزوفلوران في الأكسجين في غرفة حضانة صغيرة قبل نقل الفأر إلى قناع وجه يحتوي على 2.1٪ متزو فلور. استخدم وحدة تخدير مجهزة بوسادة تسخين لمنع انخفاض حرارة الفأر.
2. قم بإصلاح الفأر المخدر بيد واحدة وقم أولا بحقن 30 ميكرولتر من البروتين السكري قليل التغصن المايلين (MOG) - الببتيد aa_35-55 (MOG_35-55) / أكمل مستحلب فرويند المساعد (CFA) تحت الجلد في أجنحة الساق الخلفية (الشكل 1: 1 + 2 ؛ في المجموع 60 ميكرولتر ؛ الجناح الأيسر 30 ميكرولتر والجناح الأيمن 30 ميكرولتر) على مقربة من الغدد الليمفاوية
الأربية.
3. ضع الفأر على بطنه وحقن 20 ميكرولتر من مستحلب MOGaa_35-55 / CFA في الأنسجة الدهنية الرخوة اليمنى واليسرى في جذر الذيل (الشكل 1: 3 + 4 ؛ في المجموع 40 ميكرولتر ؛ جذر الذيل الأيسر 20 ميكرولتر وجذر الذيل الأيمن 20 ميكرولتر) وقطرة صغيرة من مستحلب MOGaa_35-55 / CFA في عنق الفأر (الشكل 1: 5).
4. حقن 100 ميكرولتر من محلول سم السعال الديكي (PTx) داخل الصفاق في الفأر. أمسك رأس الفأر أسفل مركز الجسم لتجنب الحقن في الأمعاء.
5. استبدل النظام الغذائي للصيانة (بثق العناصر الغذائية الرئيسية: البروتين الخام 18.5٪ ؛ الدهون الخام 4.5٪ ؛ الألياف الخام 4.5٪ ؛ الرماد الخام 6.5٪ ؛ النشا 35٪ ؛ الطاقة الأيضية: 13.1 ميجا جول / كجم) بالنظام الغذائي للتكاثر (بثق العناصر الغذائية الرئيسية: البروتين الخام 23.5٪ ؛ الدهون الخام 5.5٪ ؛ الألياف الخام 3٪ ؛ الرماد الخام 5.7٪ ؛ النشا 36٪ ؛ الطاقة الأيضية: 14.3 ميجا جول / كجم) من أجل تزويد الفئران بأغذية تحتوي على نسبة عالية من الطاقة قبل وأثناء المرض السريري المتوقع.
6. قم بإزالة قناع الوجه وانقل الماوس إلى قفص المنزل باستخدام وسادة تسخين. بعد 10 دقائق ، تأكد من أن الماوس مستيقظ ومتحرك تماما.
7. كرر حقن PTx (الخطوة 1.4) بعد 48 ساعة من العلاج الأول.

2. تسجيل الفئران EAE

1. تحقق من الحالة الصحية لفئران EAE كل صباح من خلال إلقاء نظرة داخل الأقفاص.
2. سجل فئران EAE بعد ظهر كل يوم.
3. أخرج كل فأر فردي مدرج في تجربة EAE من القفص وتحقق مما إذا كان الذيل يحتوي على نغمة عن طريق تحريكه لأعلى بإصبع. سوف يحافظ الفأر السليم على ذيله مرفوعا (الذيل له نغمة). إذا بدأ EAE السريري ، فسيكون تونس الذيل أقل ، ويمكن رؤيته من خلال الانخفاض التدريجي للذيل. في النهاية ، لن يتمكن الفأر من رفع ذيله على الإطلاق.
4. ضع كل فأر فردي مدرج في تجربة EAE على المقعد النظيف وراقب وتوثيق سلوك المشي. انظر الجدول 1 للحصول على معايير تسجيل لتقييم شدة المرض (درجة EAE).
5. قم بتقييم وتوثيق وزن كل فأر مدرج في التجربة.
6. لضمان امتصاص الطعام والماء الكافي من قبل الفئران التي تظهر درجة EAE سريرية 1 ، قم بتوفير الطعام المبلل في طبق بلاستيكي في قاع القفص وانتعاشه يوميا.

Results

p class = "jove_content" fo: keep-together.within-page = "1" >
الشكل 1: التمثيل الرسومي لمواقع الحقن لتحريض EAE. 1) موقع الحقن ل 30 ميكرولتر مستحلب MOG في الجانب الأيمن ، 2) موقع الحقن ل 30 ميكرولتر مستحلب MOG في الجانب الأيسر ، 3) موقع الحقن ل 20 ميكرولتر مستحلب MOG في جذر الذيل الأيسر ، 4) موقع الحقن ل 30 ميكرولتر مستحلب MOG في جذر الذيل الأيمن ، 5) موقع الحقن لقطرة صغيرة من مستحلب MOG في الرقبة.

الجدول 1: معايي...

Materials