مقالة منهجية

تحديد اضطراب الحاجز الدموي الدماغي باستخدام الأصباغ الفلورية في نموذج فأر EAE

يوليو 8, 2025

في هذه المقالة

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصدر: Tietz، S. M.، et al.، تصور ضعف الحواجز البطانية والدبقية لوحدة الأوعية الدموية العصبية أثناء التهاب الدماغ والنخاع المناعي الذاتي التجريبي في الجسم الحي. (2019).

يوضح هذا الفيديو إجراء لتقييم اضطراب الحاجز الدموي الدماغي في نموذج فأر EAE. يتم حقن الأصباغ الفلورية ذات الأحجام المختلفة بشكل رجعي ويدور عبر الأوعية الدموية في الدماغ. تتسرب الصبغة الأصغر من خلال الفجوات إلى أنسجة المخ ، بينما تدخل الصبغة الأكبر فقط إذا كان الاضطراب شديدا ، ويرتبط بمدى تلف الحاجز.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

< p class = "jove_title" >1. فحص النفاذية في الجسم الحي

  1. تحضير الحلول:
    1. بالنسبة لمحاليل مخزون ديكستران ، قم بإذابة 10 مجم من 10 كيلو دالتون ديكستران أليكسا فلور 488 بالإضافة إلى 3 كيلو دالتون ديكستران تكساس ريد في 500 ميكرولتر من محلول كلوريد الصوديوم 0.9٪ (20 مجم / مل).
    2. بالنسبة لمحلول عمل ديكستران ، قبل الحقن مباشرة ، 55 ميكرولتر من محلول مخزون 10 كيلو دالتون ديكستران أليكسا فلور 488 (20 مجم / مل) على قطعة من فيلم مانع التسرب وأضف 55 ميكرولتر من محلول مخزون تكساس الأحمر 3 كيلو دالتون (20 مجم / مل). امزج واجمع 100 ميكرولتر في حقنة دقيقة يمكن التخلص منها (التركيز النهائي 2 مجم / 100 ميكرولتر).
    3. للحصول على محلول مخزون 10٪ من الفورمالديهايد (بارافورمالدهايد ، أو PFA) ، امزج 10 جم من مسحوق PFA النقي الإضافي ، و 100 مل من PBS ، و 200 ميكرولتر من هيدروكسيد الصوديوم 1N (NaOH) في دورق زجاجي نظيف وقم بتسخينه إلى 56 درجة مئوية بدقة تحت التحريك باستخدام محرك مغناطيسي. يحفظ في درجة حرارة 56 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة حتى يذوب PFA تماما. قم بتبريد إلى درجة حرارة الغرفة ، واضبط درجة الحموضة على 7.4 ، ثم قم بالتصفية من خلال مرشح ورقي. يحفظ في درجة حرارة 20 درجة مئوية. يمكن تخفيف محلول المخزون بشكل أكبر باستخدام محلول ملحي مخزن بالفوسفات أو PBS.
    2. قم
  2. بتخدير الفئران C57BL / 6 السليمة أو الفئران C57BL / 6 التي تعاني من التهاب الدماغ والنخاع المناعي الذاتي التجريبي ، أو EAE مع الأيزوفلوران (سيتم تخدير الفأر لمدة دقيقة واحدة تقريبا). استخدم نظاما آليا (ستتعرض الفئران ل 4.5٪ من الأيزوفلوران في الأكسجين في غرفة الحث ثم يتم نقلها إلى قناع وجه يحتوي على 2.1٪ من الأيزوفلوران).
  3. ضع الفأر المخدر في وضع جانبي على الطاولة ، ثم عن طريق الوريد (على سبيل المثال ، الرجعية المدارية) قم بحقن 100 ميكرولتر من أدوات تتبع الفلورسنت في الماوس قبل أن يستيقظ الفأر.
  4. قم بإزالة قناع الوجه على الفور وتأكد من أن الفأر مستيقظ تماما ومتحرك بعد التخدير القصير. دع جهاز التتبع يدور لمدة 15 دقيقة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
لم يتم الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات ديكستران أليكسا فلور 488 (10,000 ميجاوات) على سبيل المثال المجسات الجزيئية د22910 يحفظ في درجة حرارة -20 درجة مئوية؛ حماية من الضوء ديكستران تكساس ريد (3000 ميجاوات) إنفيتروجين د3328 يحفظ في درجة حرارة -20 درجة مئوية؛ حماية من الضوء صيانة الغذاء على سبيل المثال PROVIMI KLIBA SA 3436 بارافورمالدهيد ميرك 30525-89-4 كلوريد الصوديوم 0.9٪ ب. براون 3535789 فيلم الختم مثل Parafilm M على سبيل المثال سيجما ألدريتش ص 7793 حقنة 1 مل على سبيل المثال بريمو 62.1002 [م]

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

مقالات ذات صلة