Method Article

القياس الكمي لتوزيع بروتين ما قبل المشبكي في دماغ الفأر باستخدام التألق المناعي

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصدر: Wallrafen، R.، et al. تحديد التوزيع غير المتجانس لبروتين متشابك في دماغ الفأر باستخدام التألق المناعي. J. Vis. Exp. (2019).

يوضح هذا الفيديو تلطيخ التألق المناعي لشريحة دماغ الفأر لتحديد توزيع بروتين معين قبل المشبكي. تتضمن العملية حجب المواقع غير المحددة ، وتطبيق الأجسام المضادة الأولية للبروتين المستهدف وعلامة مرجعية ، متبوعا بوضع العلامات الثانوية على الأجسام المضادة والتلوين النووي. تضمن العلامة المرجعية القياس الكمي الدقيق من خلال توفير خط أساس ثابت ، ويتم تحليل توزيع البروتين قبل المشبكي عبر مناطق الدماغ باستخدام الفحص المجهري متحد البؤر.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على عينات حيوانية والموافقة عليها من قبل لجنة المراجعة الأخلاقية الحيوانية المناسبة.

< ص الفئة = "jove_title" >1. التألق المناعي

  1. قم بإعداد المحاليل بما في ذلك المخزن المؤقت للانسداد ، ومخزن الأجسام المضادة ، ومخزن الغسيل 1 ، ومخزن الغسيل 2 (انظر الجدول 1).
  2. اشطف الشرائح مرة واحدة باستخدام عازلة الفوسفات (PB) لإزالة مركب درجة حرارة القطع المثلى الزائدة (OCT).
    1. قم بإزالة المحلول بماصة بلاستيكية دون امتصاص شرائح الدماغ. أضف 250 ميكرولتر من PB الطازج مع ماصة 1000 ميكرولتر.
      أنذر: يجب ألا تجف الشرائح ، لذا قم بإزالة السوائل وإضافتها جيدا.<....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
لم يتم الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

Materials

List of materials used in this article Name Company Catalog Number Comments 1.5 مل أنابيب التفاعل إيبندورف 30120094 50 مل أنابيب تفاعل غرينر بيو ون 227261 مولتي ويل 24 بئر فيشر ساينتيك 087721ه ماصة بلاستيكية (يمكن التخلص منها) سارستيدت 8,61,176 ماصة 1000 مل رينين 17014382 ماصة 2 مل إيبندورف 3123000012 دوامة عبقرية 3 إيكا 3340001 شرائح مجهر Menzel فيشر ساينتيك 10144633 ج مجسم لايكا LSM800 زييس مجهر متحد البؤر برنامج تلفزيوني (10X) روش 11666789001 الأنسجة تيك ساكورا 4583 اكتوبر نا2HPO4 بيوفروكس 5155 كيلو جرا001 NaH2PO4 ميرك 1,06,34,60,500 ريال مصل الماعز العادي ميرك ميليبور S26-100 مل مصل الحمار العادي ميرك S30-100 مل تريتون X-100 ميرك 1,08,60,31,000 أرنب مضاد للمحرك الأنظمة المشبكية RRID: AB_10804285 خنزير غينيا مضاد للسينبتوفيسين الأنظمة المشبكية RRID: AB_1210382 الحمار المضاد للأرانب AF647 جاكسون للأبحاث المناعية RRID: AB_2492288 الماعز المضاد للفأر AF488 جاكسون للأبحاث المناعية RRID: AB_2337438 مويول 4-88 كالبيوكيم 475904 برنامج ZEN2 الأزرق زييس برنامج الفحص المجهري فيجي إيمج جيه برنامج التحليل مايكروسوفت إكسل مايكروسوفت

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Presynaptic ProteinImmunofluorescence StainingMouse BrainConfocal MicroscopyFluorescence IntensityPrimary AntibodiesSecondary AntibodiesNuclear CounterstainingBrain Slice PreparationImage Analysis Fiji

Related Articles