$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.
< p class = "jove_title" >
1. استئصال الكرانيكوة والتأثير القشري المتحكم فيه
- تحضير جهاز التأثير القشري المتحكم فيه والمستلزمات الجراحية.
- قم بتحميل حقنة ذات طرف انزلاقي سعة 1 مل ب 0.5 مل من المحلول الملحي المعقم لري الجروح. قم بتوصيل إبرة 25 جم بالمحقنة للتحكم في الري.
- تحضير محلول مخفف من السيكلوسبورين A (CsA) في ثنائي ميثيل سلفوكسيد (DMSO) إلى تركيز نهائي قدره 1 مجم / مل. قم بتحميل حقنة ثانية ذات طرف انزلاقي سعة 1 مل ب 0.5 مل من محلول CsA لتثبيط المناعة. قم بتوصيل إبرة 25 جم أو أكبر بحقنة CsA.
- قم بتوصيل مكبس التأثير القشري المتحكم فيه بذراع على إطار تجسيمي واضبطه على زاوية 15 درجة. قم بتوصيل مسبار اصطدام مقاس 3 مم بالمكبس.
- اضبط سرعة التأثير على 1.5 م / ث ووقت السكون الاصطدام على 0.1 ثانية لإحداث إصابة قشرية خفيفة.
- إجراء استئصال التقرن من جانب واحد
- ضع الفأر في غرفة تحريض التخدير متصلة بمبخر الأيزوفلوران بمصدر أكسجين مضغوط. تحفيز التخدير مع ~ 3٪ الأيزوفلوران عند ~ 0.7 لتر / دقيقة من الأكسجين. تحقق من عمق التخدير من خلال عدم الاستجابة لقرصة إصبع القدم.
- احلق فروة الرأس باستخدام المقصات الكهربائية وامسح أي فرو فضفاض.
- ضع الماوس في إطار تجسيمي مع مخروط أنف توصيل مخدر متصل.
- ضع وسادة تسخين 37 درجة مئوية على الإطار التجسيمي أسفل الماوس للحفاظ على درجة حرارة الجسم تحت التخدير. ثبت الرأس في مكانه باستخدام قضبان الأذن وقضيب العض وتوجيه الرأس بحيث يكون عظم الجمجمة الأمامي أفقيا. حافظ على التخدير عند ~ 1.5٪ -2٪ إيزوفلوران طوال مدة الجراحة.
- لأداء الرعاية قبل الجراحة والتحضير الجراحي المعقم ، ضع مرهم العين المضاد الحيوي على العينين باستخدام قطعة قطن معقمة. ضع محلولا يحتوي على اليود على منطقة فروة الرأس المحلوقة. قم بإزالة هذا مع 70٪ من الإيثانول. قم بتغطية بستارة جراحية مزخرفة بحيث يكون الجزء العلوي من الرأس مرئيا ، لكن العينين مغطاتان.
- قم بعمل شق خط الوسط (1.5-2 سم) على فروة الرأس باستخدام مشرط أو مقص. استخدم مسحات قطنية معقمة لتنظيف الجرح وتنظيف اللفافة اليسرى من خط الوسط عند بريجما.
- استخدم مسبار الاصطدام لتحديد موقع استئصال التلوين.
- اضبط النقطة المرجعية التجسيمية (X = 0 ، Y = 0) على bregma. اضبط المسبار بشكل جانبي على 2 مم يسار خط الوسط. حدد دائرة قطرها 5 مم حول المسبار باستخدام علامة دقيقة وآمنة جراحيا. ارفع المصدم وقم بتدويره خارج موضعه.
- استخدم الأداة اليدوية لمجموعة المحركات الدقيقة الدوارة عالية السرعة لعمل ثقب مفتوح في الجمجمة باستخدام رأس دائري 0.6 مم أو 0.8 مم لقمة ثقب بأقصى سرعة ~ 70٪ -80٪. اضغط خفيفا على الجمجمة أثناء الحفر على طول المخطط المحيطي 5 مم لتخفيف هذا الحد.
- لا تضغط بشكل زائد أثناء الحفر. يمكن أن يتسبب الاهتزاز أو الضغط أو الاختراق العرضي في إصابة القشرية. بدلا من ذلك ، اسمح لسرعة مثقاب بالقيام بالعمل.
- لا تحفر في أي مكان معين لفترة طويلة لتجنب الاحتكاك المفرط للجمجمة. قم بري استئصال التقرن من حين لآخر بمحلول ملحي معقم لإزالة الحطام وتقليل التسخين من الأداة الدوارة.
- انتبه جيدا أثناء الحفر فوق خط الخياطة الإكليلية لأن هذه النقاط معرضة للنزيف.
- استخدم زوجا من الملقط الدقيق لإزالة سديلة الجمجمة عندما يكون مخطط استئصال الجرافة ضعيفا بدرجة كافية. أمسك السديلة وسطيا ، وارفعها برفق واسحبها جانبيا بحركة شعاعية.
- لا تتلف الأم الجافية عند رفع السديلة ؛ يمكن أن يتسبب ذلك في إصابة خطيرة ونزيف.
- إجراء إصابة تأثير قشرية خفيفة يتم التحكم فيها
- نظف مسبار الاصطدام باستخدام وسادة تحضير الكحول المعقمة. حرك مسبار الاصطدام مرة أخرى إلى موضعه فوق القشرة المكشوفة. اخفض المسبار حتى يلامس سطح الأم الجافية. ضع علامة على هذا الموضع على أنه Z = 0.
- اسحب المكبس وانتقل إلى Z = -1.0 مم. قم بتفريغ المكبس للتأثير على القشرة.