تحديد عدوى فيروس نقص المناعة البشرية النشطة في نموذج الفئران

الملخص

المصدر: Li ، H. ، McLaurin، et al. نموذج الفئران لعدوى الدماغ EcoHIV. J. Vis. Exp. (2021).

يوضح هذا الفيديو إجراء حقن فيروسات فيروس نقص المناعة البشرية الخيالي في قشرة دماغ الفئران ، حيث يندمج الحمض النووي الريبي للفيروس في جينوم المضيف ، ويتكاثر وينتشر لإنشاء عدوى نشطة بفيروس نقص المناعة البشرية في النموذج التجريبي.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

< p class = "jove_title" >1. EcoHIV-EGFP [بروتين الفلورسنت الأخضر المعزز لفيروس نقص المناعة البشرية] جراحات التجسيم

1. تخدير الفئران باستخدام 3٪ سيفوفلوران. عندما لا تستجيب الفئران للمنبهات الضارة وتكون ردود أفعالها غائبة ، انتقل إلى الخطوة 1.2.
2. حلق الشعر من منطقة الدماغ وتعقيم الجلد مرتين باستخدام 70٪ إيثانول ومقشر يحتوي على الكلورهيكسيدين. قم بتأمين الجرذ في وضع الانبطاح في الجهاز التجسيمي.
3. قم بعمل شق (5-6 سم) عبر الجلد على طول خط الوسط لفروة الرأس.
4. ضع علامة على وضعين للحفر عند 0.8 مم جانبيا ، 1.2 مم منقاري إلى بريجما. حفر حفرة (قطرها 0.4 مم) في كل موضع جمجمة.
5. تعبئة محلول فيروس العسل EcoHIV معاير (1.04 × 10⁶ TU/مل) في حقنة حقن 10 ميكرولتر. قم بتأمين المحقنة في الجهاز التجسيمي.
6. تحرك الإبرة لأسفل بالقرب من سطح فتحة الحفر. قم بالقياس والتحريك بعمق 2.5 مم.
7. نقع 1 ميكرولتر من محلول الفيروسات بمعدل 0.2 ميكرولتر / دقيقة. احتفظ بالإبرة داخل منطقة الحقن لمدة 5 دقائق. حرك الإبرة ببطء لأعلى حتى تصبح خارج جمجمة الفئران.
8. خياطة الجلد بخيط حريري 4-0.
9. عقم الشق بنسبة 70٪ إيثانول مرة واحدة. حقن البوتورفانول تحت الجلد (دوروليكس ، 0.1 مجم / كجم من وزن الجسم).
10. انقل الجرذ إلى غرفة الاسترداد باستخدام وسادة تدفئة حتى يستيقظ.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات محلول مضاد حيوي مضاد للفطريات سيلجرو 30004CI 100 مرة غطاء زجاجي VWR 637-137 نقب إيثيكون فيكريل بلس مضاد للبكتيريا ، 4-0 بولي جلاكتين 910 خيوط ، 27 بوصة. خ م-2 ميد فيت إنترناشيونال VCP422H حقنة هاميلتون هاملتون 1701 ملقط القزحية أدوات الدقة العالمية 15914 مقص القزحية أدوات الدقة العالمية 500216 جهاز التجسيم أدوات كوبف نموذج 900 مقص فاناس أدوات الدقة العالمية 500086