إحداث احتشاء الجسر الحاد في نموذج الفئران باستخدام التحفيز الكهربائي

الملخص

< p class = "jove_content" >المصدر: Luo ، M. ، et al. إنشاء احتشاء بونتين حاد في الفئران عن طريق التحفيز الكهربائي. J. Vis. Exp. (2020)

يوضح هذا الفيديو إجراء للحث على تلف الأنسجة أو احتشاء جسر الجرذ المخدر باستخدام التحفيز الكهربائي.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

< p class = "jove_title" >1. إنشاء احتشاء في الجسر

1. سخني وسادة التدفئة مباشرة قبل التخدير.
2. قم بتوصيل مثقاب الجمجمة بالحامل الموجود على الإطار التجسيمي.
3. حقن الفئران داخل الصفاق مع 50 ملغم / كجم الكيتامين و 5 مجم / كجم زيليازين. تحقق من عدم وجود استجابة لقرص إصبع القدم.
4. قم بتركيب الجرذ على الإطار التجسيمي في وضع الانبطاح. ضع قضبان الأذن فوق قناة الأذن لتأمين الرأس. تأكد من أن الجمجمة تبقى أفقية لتجنب أي انحراف في الحقن.
5. حافظ على التخدير بواسطة الأيزوفلوران (100٪ أكسجين ، 2.5٪ إيزوفلوران) عبر مرفق مخروط الأنف التجسيمي للفئران ذات منافذ المدخل والمخرج. استخدم وسادة تسخين للحفاظ على درجة الحرارة عند 37 درجة مئوية ومراقبتها طوال العملية.
6. استخدم مرهم العين لمنع جفاف القرنية. استخدم الملقط لقرص الكفوف لضمان عدم الاستجابة للألم قليلا.
7. احلق شعر الجمجمة باستخدام ماكينة حلاقة دقيقة. ضع المقشر الجراحي الكلورهيكسيدين بشكل دائري بدءا من موقع الشق الجراحي ويدور للخارج.
8. قم بعمل شق خط الوسط بطول 3 سم بمشرط من خط الكانثوس الجانبي الثنائي إلى 0.5 سم خلف اليافوخ الخلفي ، والذي يجب أن يضع قلم التحديد الجراحي علامة عليه.
9. استخدم قطعة قطن لإزالة الدم.
10. يجب وضع قطعة من الشريط الجراحي على كل جانب من رفرف الجلد لكشف فروة الرأس (الشكل 1).
11. قم بإزالة الأنسجة الضامة برفق من عظم الجمجمة باستخدام قطعة قطن مغموسة في 0.9٪ كلوريد الصوديوم. إذا لم تتم إزالتها ، فسوف تعلق الأنسجة الضامة في المثقاب.
12. حدد البريجما. اختر النقطة المركزية للبريجما كنقطة أصل وقم بتمييزها باستخدام قلم تحديد جراحي أسود رفيع الطرف.
13. ضع مثقابا عند 6.0 مم AP ، 2.0 مم مل (يتراوح من 0.5 إلى 3.0 مم ، الشكل 2 أ).
14. قم بإجراء حج القحف (قطر 1 مم) باستخدام مثقاب أوتوماتيكي. تابع بحذر لأن هذه النقطة قريبة من الجيوب الأنفية الوريدية.
15. قم بإزالة المثقاب من الإطار التجسيمي.
16. ضع مسبارا 22 جيجا بغمد معزول في الإطار التجسيمي (الشكل 3 أ). يجب وضع طرف المسبار 2 مم فوق الطرف القريب من الغمد (الشكل 3 أ ، ب ؛ الشكل 2 ب).
17. تأكد من دخول الغمد إلى الدماغ 7 مم (7 مم DV ، الشكل 2 ب ؛ الشكل 1 ج).
18. تقدم المسبار على طول الغمد (الشكل 1 د) حتى يصبح طرف المسبار 9 مم تحت سطح الدماغ (الشكل 2 د).
19. قم بتوصيل الأقطاب الكهربائية بمحفز كهربائي (الشكل 3 ج). قم بتوصيل الأنود بالمسبار كما هو موضح في الشكل 1D. قم بتوصيل الكاثود بالفئران (عادة بأذن الفئران).
20. قم بتشغيل المحفز الكهربائي وقم بإعداد المعلمات التالية: عرض النبضة المفردة = 4,050 مللي ثانية ؛ الجهد = 50 فولت ؛ والتيار = 4 مللي أمبير (الشكل 3C). أثناء التحفيز الكهربائي ، سيظهر الجرذ ارتجاف. في هذه الدراسة ، لم يتم تشغيل الجهاز لفئران المجموعة الضابطة المستخدمة في الاختبارات السلوكية والتصوير بالرنين المغناطيسي و TTC.
21. اترك المسبار في موضعه لمدة 5 دقائق بعد التحفيز.
22. قم بإزالة المسبار من الدماغ (الشكل 1F).
23. استخدم الأسمنت العظمي لتغطية حج القحف. اترك الأسمنت يجف قبل خياطة الجرح.
24. خياطة الجرح مع 4-0 خيوط خياطة البولي أميد. بعد ثلاث أو أربع غرز ، اربط عقدة جراحية قياسية 2-1-1.
25. حقن الفئران بالبنسلين (0.25 مل ، 80 وحدة دولية مخففة في 4 مل من المحلول الملحي) داخل الصفاق لمنع العدوى.
26. حقن الفئران تحت الجلد مع ميلوكسيكام بجرعة 2 ملغ/كغ ثم كرر ذلك كل 24 ساعة.
27. راقب الفئران كل 15 دقيقة حتى تستيقظ تماما وأعدها إلى القفص باستخدام وسادة تدفئة. توفير الوصول المجاني إلى الطعام والماء حتى التضحية.
    ملاحظه: يجب أن تتبع جميع الإجراءات مبادئ الجراحة المعقمة. قبل الجراحة ، ارتد قناعا جراحيا وقفازات معقمة بعد فرك اليدين الجراحي. حافظ دائما على مادة خياطة معقمة داخل المجال المعقم.

النتائج

الشكل 1: إنشاء الاحتشاء. (أ) ثقب في الجمجمة. (ب) يتم نقل الغمد إلى الحفرة. (ج) حقن الغمد. (د) حقن المسبار. (ه) القطب (السهم الأحمر) متصل. (و) إزالة المسبار. (ز) ثقب (سهم أحمر) يسار في سطح الدماغ.

< p class = "jove_content" fo: keep-together.within-page = "1" >

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات 4-0 شفط شنغهاي جينتشونغ الأدوات الجراحية شريط لاصق شنغهاي جينتشونغ الأدوات الجراحية نظام التخدير الحيواني الدفع الخلفي ارتد قناعا عند استخدام النظام الأسمنت العظمي شنغهاي جينتشونغ أداة جراحية المشبك المعالج شنغهاي جينتشونغ أداة جراحية مقص المناديل العامة شنغهاي جينتشونغ أداة جراحية إندوفور Guoyao من الصين تعقيم إيزوفلوران الدفع الخلفي 217181101 جهاز صنع الآفات شنغهاي يويان صنع آفة نظام التصوير بالرنين المغناطيسي بروكر بيوسبين تأكيد الاحتشاء في الجسم الحي حامل إبرة شنغهاي جينتشونغ أداة جراحية البنسيلين Guoyao من الصين الوقاية من العدوى مجس أنكي تحتاج إلى بعض التعديل نصائح Q شنغهاي جينتشونغ أداة جراحية مقص القص شنغهاي جينتشونغ أداة جراحية جهاز التجسيم الدفع الخلفي إبرة خياطة شنغهاي جينتشونغ أداة جراحية الأنسجة التي تحمل الأنسجة شنغهاي جينتشونغ أداة جراحية TTC سيجما ألدريتش BCBW5177 لتأكيد الاحتشاء في المختبر