$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.
< p class = "jove_title" >
1. القسطرة الشريانية
- تخدير الفأر بحقن داخل الصفاق من الكيتامين والزيلازين ومسكن وفقا للممارسة المحلية (على سبيل المثال ، البوبرينورفين). اقرص الأطراف الخلفية بالملقط للتأكد من العمق الصحيح للتخدير.
ملاحظه: في هذه الدراسة ، تم استخدام ذكور الفئران C57BL / 6N في سن 8-12 أسبوعا (الوزن 20-25 جم). اختبر المؤلفون ذكور BALB / c من نفس العمر دون جدوى لكنهم لم يجربوا سلالات أخرى.
- قم بإزالة الشعر في المناطق ذات الاهتمام (الرأس والرقبة) باستخدام ماكينة حلاقة كهربائية. تأكد من عدم وجود شعر متساقط لمنع تلوث الجروح. بعد ذلك ، قم بتطهير المجال الجراحي بنسبة 70٪ من الإيثانول / الكلورهيكسيدين / البيتادين وضع الفأر ضعيفا مع توجيه الرأس إلى الجراح.
- قم بعمل شق خط الوسط في عنق الرحم باستخدام مقص تشريح.
- تشريح الغدد تحت الفك السفلي وأنسجة عضلة الرقبة وفصلها من أجل فضح الشريان السباتي المشترك. استخدم تشريحا حادا في الغالب عن طريق الملقط.
- ضع ثلاثة 8-0 أربطة الحرير تحت الشريان السباتي المشترك الأيمن.
- ضع مشبوطا على الرباط القريب وقم بشد التوتر في الشريان بحيث يتم تعليق التدفق.
- أغلق الرباط الأبعد.
- أدخل القسطرة الشريانية من خلال ثقب جلدي صغير مشكل مسبقا على الجانب الجمجفي من الشق. اضغط على تجويف القسطرة وتشوهه إذا بدت كبيرة جدا لتقليل ارتجاع الدم. ثبت مع جميع الأربطة الثلاثة.
- ثبت القسطرة على الجلد لتجنب الخلع. افعل ذلك باستخدام خياطة (على سبيل المثال ، 5-0 خيوط أحادية ، غير قابلة للامتصاص) تربط القسطرة بالجلد في منطقة ثقب الجلد المشكلة.
< p class = "jove_title" >
2. فغر القصبة الهوائية
- قم بتشريح عضلات ما قبل القصبة الهوائية بصراحة باستخدام الملقط.
- ضع اثنين 8-0 أربطة الحرير تحت القصبة الهوائية.
- قم بتقطيع القصبة الهوائية باستخدام مقص صغير بالقرب قدر الإمكان لتجنب التهوية من جانب واحد. استخدم خط قطع أفقي بين غضروفين في القصبة الهوائية.
- أدخل أنبوب التهوية وقم بتثبيته باستخدام كل من الأربطة المعدة.
ملاحظه: لا يلزم ربط الطرف القريب من القصبة الهوائية.
- أغلق الجلد بخياطة جارية (على سبيل المثال ، 6-0 شعيرات أحادية ، غير قابلة للامتصاص).
- قم بتهوية الماوس بتردد 150 / دقيقة وحجم المد والجزر 200 ميكرولتر.
< p class = "jove_title" >
3. تحريض الموت الدماغي (BD)
- رتب الماوس في وضع الانبطاح.
- قم بإزالة الجلد من الجمجمة باستخدام المقص الجراحي والملقط لتثبيت الجلد.
- حفر بئر من عيار 1 مم بشكل شبه متوسط فوق القشرة الجدارية اليسرى. توقف عن الحفر قبل اختراق العظم المضغوط الداخلي وأم الجافية.
- اخترق جسر الأنسجة النهائي للجمجمة باستخدام ملقط حاد ، وإزالة الحواف الحادة.
- أدخل قسطرة البالون بحيث تكون بالكامل داخل تجويف الجمجمة. تأكد من أن البالون مملوء مسبقا بالمحلول الملحي ويتم إخلاء كل الهواء.
- ابدأ التضخم عند ~ 0.1 مل / دقيقة على مدى 10-15 دقيقة (الحجم الإجمالي 0.8-1.2 مل) بمساعدة مضخة حقنة.
ملاحظه: سيظهر الفأر الرمع العضلي ، وداء المدريات ، والمزيد من نشاط النوبات ، والشهقات الآلامية.
- نطق دماغ الفأر ميتا بمجرد أن يصبح ذيل الفأر متيبسا ومنتصبا.
ملاحظه: يتم تأكيد BD من خلال ذروة ضغط الدم الأولية المميزة (منعكس كوشينغ) ، وغياب ردود الفعل في جذع الدماغ ، والتنفس التلقائي. يجب تجنب اختبار انقطاع النفس المنتظم أثناء التجارب ، حيث قد تصبح الفئران غير مستقرة في الدورة الدموية بسبب نقص الأكسجين.
- وقف تضخم قسطرة البالون.
- ضع بطانية تدفئة فوق الماوس لتجنب انخفاض حرارة الجسم.