$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.
< p class = "jove_title" >
1. إنشاء الاعتلال العصبي Resiniferatoxin (RTX)
تنبيه: RTX سام للأعصاب وخطير. عند ملامسته ، يعمل كمهيج للعينين والأغشية المخاطية والجهاز التنفسي العلوي. تجنب الاستنشاق وارتداء نظارات ومعاطف المختبر أثناء تحضير RTX. اشطفه بكمية كبيرة من الماء في حالة ملامسة الجلد أو بعد التعامل معه.
- أضف 1 مجم من مسحوق RTX إلى خليط 200 ميكرولتر بحجم متساو من Tween 80 والإيثانول المطلق (100 ميكرولتر لكل مذيب).
- قم بتخزين محلول RTX (12 ميكرولتر / قارورة) وتخزينه عند -20 درجة مئوية لمدة تصل إلى 3 أشهر. هذا يشكل سهم RTX. تجاهل حل RTX المتبقي عند انتهاء الصلاحية.
- خفف مخزون RTX بمحلول ملحي عادي إلى حجم نهائي قدره 600 ميكرولتر. يجب أن يكون التركيز النهائي لمحلول RTX 0.01٪ ، وهو ما يعادل 1 ميكروغرام RTX في محلول مركبة 10 ميكرولتر.
- استخدم ذكور الفئران ICR البالغة البالغة من العمر 8 أسابيع (35-40 جم) كحيوانات تجريبية وقم بإعطاء جرعة واحدة من محلول RTX (الجرعة: 200 و 50 و 10 ميكروغرام / كجم ، على التوالي) داخل الصفاق (IP) مع حقنة حقن مجهرية للفئران. تم تخدير الفئران بواسطة جهاز الاستنشاق بنسبة 5٪ من الأيزوفلوران للتخدير العميق. إذا أظهرت الفئران حركة انسحاب الأطراف أثناء حقن RTX ، فيجب أن تأخذ الفئران استنشاق أطول للتخدير. < / >
مثال: إذا كان وزن الماوس 40 جراما ، فسيتلقى 20 ميكرولتر من محلول RTX ، وهو ما يمثل جرعة 50 ميكروغرام / كجم.
- امنح مجموعة واحدة من الفئران حجما متساويا من السيارة (10٪ توين 80 و 10٪ إيثانول مطلق في محلول ملحي) كعنصر تحكم.
- بعد حقن RTX ، أعد الفئران إلى قفص بلاستيكي في دورة مظلمة مدتها 12 ساعة / 12 ساعة وقدم الطعام والماء بشكل خاص.