مقالة منهجية

نمذجة تنكس الشبكية وتجديدها في أسماك الزرد باستخدام إصابة الليزر البؤري

يوليو 8, 2025

في هذه المقالة

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصدر: Conedera، F. M.، et al. Müller Glia Cell Activation في نموذج تنكس الشبكية وتجديد الشبكية الناجم عن الليزر في الزرد. J. Vis. Exp. (2017).

< p class = "jove_content" >يوضح هذا الفيديو إجراء للحث على تنكس الشبكية في أسماك الزرد البالغة باستخدام إصابة الليزر. يستهدف الليزر الخلايا المستقبلة للضوء في شبكية العين ، مما يؤدي إلى موت الخلايا وعملية تنكسية. ينشط هذا الضرر خلايا مولر الدبقية (MG) ، مما يؤدي إلى عدم تمايزها إلى أسلاف الخلايا الجذعية التي تساعد في تجديد الشبكية.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

1.

  1. حافظ على سلالة TgBAC (gfap: gfap-GFP) 167 (AB) التي تتراوح أعمارها بين 6 - 9 أشهر في ظل ظروف قياسية في الماء بدرجة حرارة 26.5 درجة مئوية ودورة إضاءة / ظلام 14/10 ساعة.

2. التخدير الجهازي القابل للانعكاس

  1. تحضير محلول مخزون ملح إيثيل 3-أمينوبنزوات ميثان سلفونات (تركايين) عن طريق إذابة 400 مجم من مسحوق التريكيين في 97.9 مل من ماء الخزان و 2.1 مل من 1 متر من محلول ملحي تريس (TBS). اضبط على درجة الحموضة 7.0 مع 1 M Tris (الرقم الهيدروجيني 9) وقم بتخزينه في درجة حرارة 4 درجات مئوية في الظلام لمدة تصل إلى شهر واحد.
    ملاحظه: يجب تحضير التريكائين في الماء مثل الظروف المعيشية الطبيعية للحيوان ، ويفضل استخدام مياه الخزان الأصلية.
  2. خفف محلول المرق إلى 1:25 في ماء الخزان واستخدمه على الفور.
  3. ضع سمك الزرد في طبق بتري مقاس 10 سم يحتوي على 50 مل من محلول التخدير حتى يصبح غير متحرك ولا يستجيب للمنبهات الخارجية (حوالي 2-5 دقائق ، حسب الوزن والعمر).
  4. انقل كل سمكة يدويا إلى حامل دبوس سيليكون مصنوع خصيصا للمعالجة بالليزر (الشكل 1 أ).
    أنذر! يمكن أن تظل الأسماك مخدرة خارج الحوض لمدة تصل إلى 10 دقائق فقط.
  5. لعكس التخدير بعد العلاج و / أو التصوير ، ضع سمك الزرد في وعاء يحتوي على مياه الخزان.
  6. لدعم التعافي ، قم بإنشاء تدفق لمياه الخزان العذبة فوق الخياشيم عن طريق تحريك الزرد ذهابا وإيابا في الماء.
فئة < p = "jove_title" >3. إصابة بؤرية الليزر على شبكية

العين فئة

ملاحظة: يتم استخدام ليزر 532 نانومتر لإحداث تلف ضوئي بؤري على شبكية السمكة الزردية. يتيح الإعداد التجريبي لليزر إنشاء إصابة شبكية بؤرية قابلة للتكرار في أسماك الزرد البالغة.

  1. قم بإعداد طاقة خرج الليزر: 70 ميجاوات ؛ القطر الجوي: 50 ميكرومتر ؛ مدة النبض: 100 مللي ثانية
    أنذر! يتطلب استخدام ضوء الليزر حماية شخصية مناسبة ووضع العلامات على المنطقة.
  2. ضع 1-2 قطرة من 2٪ هيدروكسي بروبيل ميثيل سلولوز موضعيا في العين قبل العلاج واستخدم عدسة ليزر قاع العين مقاس 2.0 مم لتركيز شعاع الليزر على شبكية العين.
    أنذر! قطرات هيدروكسي بروبيل ميثيل سلولوز لزجة وقد تسبب مشاكل في التنفس إذا استمرت على الخياشيم.
  3. ضع أربع بقع ليزر حول العصب البصري على العين اليسرى واستخدم العين اليمنى غير المعالجة كتحكم داخلي.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

p class = "jove_content" fo: keep-together.within-page = "1" >figure-results-1
الشكل 1: الإعداد لتحريض إصابة الليزر لشبكية الزرد وتحليل OCT التالي. (أ) ترتيب نظام الليزر قبل العلاج. (أ.1) يوضع سمك الزرد على حامل دبوس سيليكون مع وجود عدسة لاصقة قاع العين في مكانها قبل تطبيق شعاع الليزر مباشرة. (ب) ترتيب نظام OCT قبل التصوير. (B.1) وضع سمك الزرد أمام عدسة مصباح شق 78D قبل الكشف عن مواقع الضرر عن طريق O...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
لم يتم الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات هيدروكسي بروبيل ميثيل سلولوز 2٪ OmniVision ، نيوهاوزن ، سويسرا ن. ميثوسيل 2٪ إيثيل 3-أمينوبنزوات ميثان سولفونات سيجما ألدريتش ، بوكس ، سويسرا أ 5040 التريكايين ، MS-222 فيسولا 532 ثانية Carl Zeiss Meditec AG ، Oberkochen ، ألمانيا ن. ليزر 532 نانومتر حامل دبوس سيليكون Huco Vision AG سويسرا ن. قطع باليد من حصيرة دبوس السيليكون لصينية التعقيم وفقا لذلك. سلالة TgBAC (gfap: gfap-GFP) zf167 (AB) كيت آي تي ، كارلسروه ، ألمانيا 15204 http://zfin.org/ZDB-ALT-100308-3 محلول ملحي مخزن في تريس (TBS) سيجما ألدريتش ، بوكس ، سويسرا ص 5912 عدسة ليزر قاع العين آلات العين ، بلفيو ، واشنطن ، الولايات المتحدة الأمريكية OFA2-0

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

مقالات ذات صلة