إنشاء نموذج فأر لإصابات الدماغ الإقفارية لحديثي الولادة

الملخص

المصدر: Kim، M.، et al. التقييمات السلوكية العصبية في نموذج الفأر لإصابات الدماغ الإقفارية لحديثي الولادة. J. Vis. Exp. (2017).

يوضح الفيديو إجراء إنشاء نموذج فأر لدراسة إصابات الدماغ الإقفارية الناجمة عن نقص التأكسج لدى الأطفال حديثي الولادة. يحدد خطوات إحداث نقص التروية جراحيا وتعريض لنقص الأكسجة لتفاقم تلف الدماغ. أخيرا ، يوضح كيفية تقييم آفات الدماغ الناتجة ، مما يضمن إعداد نموذج الفأر لمزيد من التحقيق العلمي.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

< p class = "jove_title" >1. نموذج الفأر لإصابات الدماغ لحديثي الولادة

1. تخدير الجراء بالأيزوفلوران.
   1. ضع الجراء (أقل من 5) في صندوق التخدير وأغلق الغطاء.
   2. قم بتشغيل نظام التخدير لمدة 15 دقيقة تقريبا ؛ اضبط الغاز والأيزوفلوران باستخدام آلة التخدير على الطاولة. اضبط مقياس تدفق الأكسجين على 1.5 لتر / دقيقة. اضبط مبخر الأيزوفلوران على 3-5٪ لتحريض التخدير.
   3. بعد 15 دقيقة ، اضبط مبخر الأيزوفلوران على 1-2٪ للحفاظ على التخدير.
2. ضع جروا مخدرا بالكامل تحت مجهر تشريح (البطن في مواجهة الباحث) وقم بتثبيته بشريط لاصق.
3. قم بعمل شق ~ 0.7 مم في الرقبة باستخدام مقص معقم.
4. قم بإزالة الأنسجة الدهنية بعناية باستخدام ملقط معقم وفضح الشريان السباتي الأيمن من جانب واحد.
5. اربط الشريان السباتي الأيمن من جانب واحد بخياطة قابلة للامتصاص 5-0.
6. خياطة شق في الرقبة بخياطة 5-0.
7. ضع كل جرو في غرفة دافئة ناقصة التأكسج بدرجة حرارة 37 درجة مئوية لمدة ساعة واحدة للتعافي. لا تغلق غطاء الغرفة.
8. بعد ساعة واحدة من الجراحة, عندما تكون الجراء مستيقظة تماما, أغلق غطاء غرفة نقص الأكسجة وخفض مستويات الغازات لخلق ظروف نقص الأكسجين (8٪ O₂ و 92٪ N₂).
9. بعد 90 دقيقة من نقص الأكسجة ، أعد الجراء إلى أقفاصهم.
10. بعد أسبوع واحد من إصابة الدماغ HI، كرر الخطوة 1.
    1. بعد التخدير ، قم بعمل شق في فروة الرأس بمقص وملقط معقم لتحديد آفة الدماغ في المنطقة الخلفية الجانبية من نصف الكرة الأيمن.
       ملاحظه: هذا العلاج يسبب نقص الأكسجة في الجراء. يتم تقييم وجود ومدى إصابة الدماغ في جميع الفئران بصريا بالعين المجردة من خلال الجمجمة شبه الشفافة. كما هو محدد حسب حجم أو حجم تغير اللون (أي آفة الدماغ) ، يتم تصنيف الجراء إلى مجموعات. إذا لم تكن هناك إصابة قشرية مرئية ، يتم تصنيف الفأر إلى مجموعة "عدم وجود إصابة قشرية". إذا كانت هناك إصابة قشرية مرئية (أي آفة في نصف الكرة الأيمن) ، يتم تصنيف الفأر إلى مجموعة "الإصابة القشرية". نظرا لأن تصنيف الفئران إلى مجموعات يتم بعد أسبوع واحد من العملية ، يمكن تعديل التجمعات عندما يتم تحديد أشكال عينات الدماغ بوضوح في وقت التضحية.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات غرفة نقص الأكسجين شركة جيونغ دو بيو آند بلانت منشئ تجريبي نظام التخدير Fluovac لجهاز هارفارد جهاز هارفارد صندوق التخدير صندوق أكريل سائل فران (الأيزوفلوران) هانا فارم المحدودة التخدير العام (الأيزوفلوران 100 مل) الفئران CD-1 شركة أورينت المحدودة خياطة أزرق نايلون أحادية غير قابلة للامتصاص 5-0 50 سم شركة Ailee المحدودة ملحوظة 521