تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.
< p class = "jove_title" >
1. إجراء العدوى
- قم بإعداد مخزونات DENV2 (سلالة PL046) غير المكيفة9 (تم الحصول عليها في الأصل من مراكز السيطرة على الأمراض في تايوان ، تتراوح من 2.5 × 107 إلى 1 × 109 PFU / مل).
- قم بتخفيف مخزون الفيروس إلى 1 × 106 PFU مع معهد روزويل بارك التذكاري (RPMI) 1640 متوسط إلى حجم إجمالي يبلغ 40 ميكرولتر.
- املأ حقنة واحدة سعة 0.3 مل مزودة بإبرة 30 جم مع 10 ميكرولتر (2.5 × 105 PFU) من الفيروس المخفف واملأ حقنة أخرى سعة 0.3 مل مزودة بإبرة 30 جم مع 30 ميكرولتر (7.5 × 105 PFU) من الفيروس المخفف.
- أمسك الفأر الرضيع ICR (معهد أبحاث السرطان) البالغ من العمر 7 أيام وقم بالخطوات التالية.
- بالنسبة للحقن داخل المخ ، أمسك الفأر في وضع الانبطاح عن طريق الضغط على الأذن بين السبابة والإبهام ، وحقن 10 ميكرولتر من الفيروس المخفف داخل المخ في منطقة لامدا ، وهي النقطة عند تقاطع خياطة السهمية والخياطة اللامدويدية.
- بعد الحقن داخل المخ ، أمسك الفأر في وضع ضعيف باستخدام السبابة والإبهام ، وحقن 30 ميكرولتر من الفيروس المخفف داخل الصفاق برفق في بطن الفئران.
ملاحظه: لتجنب أكل لحوم البشر ، يتم استخدام 75٪ من الكحول لإحداث فقدان مؤقت للإحساس الشمي لدى الأم. بالإضافة إلى ذلك ، يقترح تغطية القمامة ببراز والدتهم وبولهم.
- ضع الفئران الرضيعة مرة أخرى في أقفاصها وانتظر لمدة 5 دقائق للتحقق من سلامتها بعد التحفيز بشغف الفئران ، بما في ذلك المشي حليب الأم.
ملاحظه: في أغلب الأحيان ، تظهر الفئران نشاطا طبيعيا بعد التحفيز ، ولا يبدو أن هناك أي آثار ضارة بعد التحدي الفني.
- قم بتقييم التقدم اليومي للفئران من حيث وزن الجسم (باستخدام توازن ميكروجرام) ، ومرض يشبه التهاب الدماغ الفيروسي الحاد (حسب تسجيل المرض كما هو موضح في القسم 2) ، ومعدل البقاء على قيد الحياة.
