مقالة منهجية

توليد التهاب عصبي يسببه الفيروس في نموذج الفأر

يوليو 8, 2025

في هذه المقالة

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصدر: لافال، ك. وآخرون. نموذج تلقيح وسادة قدم الفأر لدراسة الاستجابات الالتهابية العصبية التي يسببها الفيروس. J. Vis. Exp. (2020).

يوضح هذا الفيديو توليد الالتهاب العصبي في نموذج الفأر. يتم أخذ فأر مخدر مصاب بجروح دقيقة ، ويتم تطبيق لقاح فيروس داء الكاذب (PRV) على الجروح. يصيب الفيروس الأعصاب الطرفية ، وينتشر إلى العقد الجذرية الظهرية (DRG) ، ويصيب الحبل الشوكي والدماغ. تؤدي إصابة الخلايا العصبية في الجهاز العصبي إلى استجابة مناعية تسبب تلفا في الخلايا العصبية ، مما يؤدي إلى التهاب الأعصاب.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

< p class = "jove_title" >1. تآكل وسادة قدم الماوس

  1. تخدير فأر C57BL / 6 (5-7 أسابيع) بمخدر غاز الأيزوفلوران ، يتم تسليمه بجرعة 3٪ عبر نظام تخدير صغير (الغرفة).
    1. ضع الفأر في مستوى التخدير الجراحي على ظهره ، قبل التلقيح ، في وسادة القدم الخلفية. قم بتوصيل مخروط الأنف مع الحجاب الحاجز (شق بحجم كاف ليناسب كمامة) بالفأر وقم بتوصيل مخدر غاز الأيزوفلوران بجرعة ثابتة تتراوح من 1.5٪ إلى 2.0٪.
    2. راقب الماوس عن كثب للاستجابة للتحفيز المؤلم الناتج عن الضغط القوي على إصبع القدم بالملقط.
  2. أمسك برفق وسادة قدم خلفية واحدة باستخدام ملقط مسطح.
      قم
    1. بإزالة الجلد المجرد لوسادة القدم الخلفية برفق حوالي 20 مرة ، بين الكعب ومنصات المشي ، باستخدام لوح صنفرة (100-180 حصى). لا تحفز النزيف عن طريق الكشط المتكرر أو الضغط الزائد.
    2. باستخدام ملقط ناعم ، قشر ببطء الطبقة القرنية المنفصلة عن طريق التآكل لفضح الطبقة القاعدية.
فئة

2. تلقيح وسادة القدم PRV

  1. تحضير لقاح الفيروس المخفف إلى العيار المطلوب في وسائط DMEM التي تحتوي على 2٪ مصل بقري جنيني (FBS) و 1٪ بنسلين / ستربتومايسين (جدول المواد).
    1. قم بقياس عدد وحدات تكوين اللويحات (PFU) في مخزون الفيروس على خلايا PK15 لحساب وتوحيد الجرعة الفيروسية وتخفيف اللقاح الفيروسي وفقا لذلك.
      ملاحظه: في هذه الدراسة ، تم استخدام سلالة خبيثة من PRV (PRVBecker) بجرعة 8 × 106 PFU. تم تحسين هذه الجرعة في تجربة أولية سابقة للتأكد من أن جميع الملقحة أظهرت أعراضا سريرية بعد 82 ساعة من التلقيح (hpi).
    2. احتفظ بلقاح الفيروس على الثلج واخلطه برفق قبل الاستخدام.
  2. أضف قطرة 20 ميكرولتر من لقاح الفيروس (8 × 106 PFU) على وسادة القدم المتآكلة (الإعطاء الموضعي). إجراء التطعيمات الوهمية (المتوسطة فقط) بالتوازي.
  3. افركي برفق 10 مرات بعمود الإبرة لتسهيل امتصاص الفيروس. تجنب الخدش بنقطة الإبرة. كرر هذه الخطوة كل 10 دقائق.
  4. احتفظ بالماوس تحت التخدير لمدة 30 دقيقة حتى تجف وسادة القدم المتآكلة.
  5. بعد التوقف عن التخدير ، راقب الفأر حتى يتمكن من الحفاظ على الاستلقاء القصي ووضعه في قفص فردي للمتابعة السريرية وأخذ العينات.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
لم يتم الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات C57BL / 6 فئران (5-7 أسابيع) مختبرات جاكسون طبق بتري بوليسترين معقم يمكن التخلص منه 100 × 15 مم سيجما ألدريتش P5731500 وسط النسر المعدل من Dulbecco (DMEM) Hyclone ، GE علوم الحياة للرعاية الصحية SH30022 Dulbecco's Phophate Buffer Saline
حل (PBS) Hyclone ، GE علوم الحياة للرعاية الصحية SH30028 مصل الأبقار الجنينية (FBS) Hyclone ، GE علوم الحياة للرعاية الصحية SH30088 مقص منحني ناعم من الفولاذ المقاوم للصدأ FST 14095-11 إيزوثيسيا إيزوفلوران هنري شاين NDC 11695-6776-2 أنبوب الطرد المركزي الدقيق 2 مل دينفيل العلمية 1000945 Microtube 1.5 مل سارستدت 72692005 البنسلين / الستربتومايسين جيبكو 154022 إبرة الانزلاق الدقيقة 18G دينار بحريني 305196

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

مقالات ذات صلة