تحريض التهاب الدماغ والنخاع المناعي الذاتي التجريبي في نموذج الفأر

Abstract

المصدر: Schmitz ، K. ، et al. التلألؤ البيولوجي والتصوير بالأشعة تحت الحمراء القريبة لالتهاب العصب البصري والتهاب الدماغ في نموذج EAE للتصلب المتعدد في الفئران. J. Vis. إكسب (2017).

في هذا الفيديو ، تم إنشاء نموذج فأر للتصلب المتعدد باستخدام التهاب الدماغ والنخاع المناعي الذاتي التجريبي (EAE). يتم حقن الفأر بمستحلب يحتوي على ببتيد عصبي ومادة مساعدة ، مما يؤدي إلى استجابة مناعية تنشط الخلايا التائية ذاتية التفاعل. يتبع ذلك حقن سم السعال الديكي (PTX) لزيادة نفاذية الحاجز الدموي الدماغي ، مما يسمح للخلايا التائية ذاتية التفاعل بالتسلل إلى الدماغ. يبدأ هذا التسلل في سلسلة إشارات تؤدي في النهاية إلى تلف المايلين ، مما يحاكي حالة إزالة الميالين للتصلب المتعدد.

Protocol

فئة

1. تحريض EAE في فئران SJL / J

1. فئران
   1. استخدم فئران SJL / J البالغة من العمر 11 أسبوعا واسمح لها بالتعود على الغرفة التجريبية لمدة 7 أيام تقريبا. استخدم ن = 10 فئران لكل مجموعة.
   2. لتقييم آثار الدواء ، قم باستمرار بإعطاء الدواء والدواء الوهمي للمجموعة الضابطة عن طريق مياه الشرب أو كريات الطعام بدءا من 3 أو 5 أيام بعد التحصين (العدد = 10 لكل مجموعة). خلال ذروة المرض ، قم بإعطاء الدواء أو الدواء الوهمي مع الحليب أو 3٪ من رقائق الذرة المنقوعة بالماء بالسكر.
2. مواد التحصين
   1. استخدم مجموعة حث EAE تتكون من مستضد (ببتيد بروتين البروتيني ، PLP139-151 ، مستحلب 1 مجم / مل) في مستحلب مع مساعد فرويند الكامل (CFA ، المتفطرة السلية المقتولة بالحرارة H37 Ra) و 2 قارورة (5 ميكروغرام لكل منهما) من سم السعال الديكي المجفف بالتجميد (PTX).
   2. قم بإذابة PTX (2 ميكروغرام / مل) في محلول ملحي مخزن بالفوسفات 1x (PBS ، أي أضف 1.5 مل من PBS إلى كل أنبوب PTX ، واخلطه جيدا ، وقم بإزالته بنفس طرف الماصة ، وأضفه إلى 1 مل من PBS في أنبوب سعة 50 مل) ؛ تخلط جيدا.
3. تحصين
   1. حقن PLP / CFA تحت الجلد في جزأين ، كل منهما 100 ميكرولتر ، كلاهما في قاعدة الذيل.
   2. حقن 100 ميكرولتر من PTX داخل الصفاق (i.p.) مرتين لكل فأر, الأولى 1 - 2 ساعة بعد التحصين والثانية في 24 ساعة.
   3. بالنسبة للفئران الضابطة ، قم بحقن CFA بدون PLP (حصتان من 100 ميكرولتر) بالإضافة إلى PTX بدون PLP.

Materials