مقالة منهجية

تحريض الالتهاب العصبي في الفئران عن طريق حقن ألياف ألفا سينوكلين

يوليو 8, 2025

في هذه المقالة

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصدر: Breid ، S. et al. تصوير التلألؤ البيولوجي للالتهاب العصبي في الفئران المعدلة وراثيا بعد التلقيح المحيطي لألياف ألفا سينوكلين. J. Vis. Exp. (2017).

يوضح هذا الفيديو حقن ألياف ألفا سينوكلين في الفأر للحث على التهاب الأعصاب. يتم حقن الألياف داخل الصفاق في فأر معدل وراثيا يعبر عن بروتينات ألفا سينوكلين الطافرة. عند الوصول إلى الجهاز العصبي المركزي ، تدخل الألياف الخلايا العصبية وتحفز تراكم البروتينات الطافرة. تنتشر الركام إلى الخلايا العصبية المجاورة والخلايا الدبقية الصغيرة والخلايا النجمية. يؤدي التعرف على المجاميع إلى تحفيز الخلايا الدبقية الصغيرة للحث على التهاب الأعصاب ، مما يؤدي إلى إتلاف الخلايا العصبية.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

< p class = "jove_title" >1. نموذج

  1. الفئران المتقاطعة Tg (Gfap-luc +/-) (الفئران المعدلة وراثيا التي تعبر عن لوسيفيراز اليراع) مع الفئران النصفية Tg (M83 +/-) (الفئران المعدلة وراثيا التي تعبر عن ألفا سينوكلين البشري مع طفرة A53T العائلية) لتوليد فئران Tg ثنائية الجين (M83 + /-: Gfap-luc +/-).
  2. النمط الجيني للذرية مع تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقي (PCR) لوجود الجينات المعدلة وراثيا التي تشفر ألفا سينوكلين البشري ومع تفاعل البوليميراز المتسلسل القياسي لوسيفيراز اليراع.
    3. تلقيح
  3. في سن ستة إلى ثمانية أسابيع.
< ص الفئة = "jove_title" >2. تحضير اللقاح

  1. تحضير أحادي المؤتلف البشري ألفا سينوكلين مع طفرة A53T في محلول ملحي مخزن (TBS) يحتوي على 150 ملي كلوريد الصوديوم في 20 ملي مولار Tris-HCl (الرقم الهيدروجيني 7.2).
  2. قم بإعداد ألفا سينوكلين الليفي للتلقيح عن طريق تحريك 3 ميكروغرام / ميكرولتر من ألفا سينوكلين البشري المؤتلف الأحادي في شاكر مداري عند 800 دورة في الدقيقة و 37 درجة مئوية لمدة 5 أيام.
  3. تمييع مجموعات الألياف في محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS) للوصول إلى تركيز نهائي قدره 1 ميكروغرام / ميكرولتر للتلقيح داخل الصفاق.
  4. قم بتجزئة ألياف ألفا سينوكلين باستخدام مكبر صوتي قضيب لمدة 1 دقيقة (40 نبضة مدتها 0.5 ثانية مع توقف مؤقت لمدة ثانية واحدة بين كل نبضة وضبط السعة على 50٪) على الجليد. لتجنب التلوث عن طريق البذر المتقاطع ، استخدم مجسات صوتنة نظيفة لإعداد لقاح مختلف.
< ص الفئة = "jove_title">3. الحقن داخل الصفاق

  1. بالنسبة للحقن داخل الصفاق ، قم بتخدير قريبا في غرفة التخدير عن طريق الاستنشاق باستخدام الأيزوفلوران / الأكسجين باستخدام معدل تدفق 2 لتر / دقيقة وضبط المرذاذ على 2٪. اضغط على إصبع قدم وتأكد من أنه لا يسحب طرفه الخلفي لضمان التخدير المناسب.
  2. املأ حقنة تحت الجلد 27 جم يمكن التخلص منها ب 50 ميكرولتر من ألياف ألفا سينوكلين صوتية أو PBS.
  3. حقن مباشرة في الصفاق من الفأر وتجنب اختراق الأمعاء الدقيقة أو الأعور الموجودة خلف جدار البطن عن طريق إمساك في وضع ظهري مع توجيه الرأس بعيدا عن المحقق وإلى أسفل عند حوالي 45 درجة. راقب حتى تتعافى من التخدير.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
لم يتم الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS) إنفيتروجين 14190169 حقنة قياس 27 VWR 613-4900 إيزوفلوران بيرامال للرعاية الصحية PZN 4831850 سونوبولس ميني 20 سونيكاتير بانديلين 3648 Tg (M83 +/-) الفئران أو B6 ؛ C3-Tg (PrnpSNCA * A53T) الفئران 83Vle / J مختبر جاكسون 4479

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

مقالات ذات صلة