Method Article

تصوير وقياس مجاميع البروتين في أدمغة ذبابة الفاكهة المعدلة وراثيا

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المصدر: Donnelly، K.M.، et al. مراقبة انتقال مجاميع البروتين الشبيهة بالبريون من خلية إلى أخرى في ذبابة الفاكهة السوداء. J. Vis. Exp. (2018)

يوضح هذا الفيديو تصوير وقياس مجاميع البروتين في أدمغة ذبابة الفاكهة المعدلة وراثيا. يتم إصلاح الأدمغة وغسلها ومعالجتها بعامل مضاد للبهتان قبل تركيبها. يتم التقاط الصور باستخدام مجهر متحد البؤر وتحديدها كميا لمراقبة انتقال مجاميع البروتين الطافرة.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
فئة

1. اقتران Gal4- و QF التعبير الجيني المعدل Htt بوساطة ذبابة الفاكهة

  1. جمع و / أو إنشاء خطوط ذبابة الفاكهة السوداء المعدلة وراثيا التي تحتوي على "سائقات" Gal4 أو QF الخاصة بالأنسجة ، بالإضافة إلى الخطوط التي تحتوي على جينات Htt من النوع البري أو المتحولة في اتجاه مجرى Gal4-UAS أو QF-QUAS. تأكد من دمج البروتينات التي يتم التعبير عنها من هذه الجينات المعدلة وراثيا مع بروتينات الفلورسنت أو علامات حاتمة للسماح بالتمايز بين منتجات الجينات المعدلة وراثيا من النوع البري Htt في نفس الذبابة. انظر الشكل 1.
    ملاحظة:     عادة ما نستخدم شظايا exon 1 من جين Htt البشري. ومع ذلك ، يمكن بدلا من ذلك توليد الذباب المعدل وراثيا للتعبير عن شظا....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

p class = "jove_content" fo: keep-together.within-page = "1" >figure-results-1
الشكل 1. نهج جيني للتعبير المقترن بالجينات المعدلة وراثيا Htt من النوع البري الطافرة باستخدام أنظمة التعبير الثنائية QF-QUAS و Gal4-UAS. في "الخلية أ" ، يتم التعبير عن بروتين Htt المتحور الذي يحمل علامة mCherry والذي يحتوي على امتداد polyQ بطول ممرض (Q91) باستخدام محرك QF الموجود في اتجاه مجرى المحفز الخاص بالأنسجة A ("PA"). في "الخلية ب" ، يتم التعبير عن Htt من النوع البري الموسوم ب YFP و.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
لم يتم الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

Materials

List of materials used in this article Name Company Catalog Number Comments محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS) ، 10X ، درجة الحموضة 7.4 ثيرموفيشر العلمي AM9625 خفف إلى 1X تريتون X-100 سيجما ألدريتش T9284-1L كيمويبس توماس العلمية هاتف: 2904F24 20٪ بارافورمالدهيد (PFA) علوم المجهر الإلكتروني 15713-ث مصل الماعز العادي (NGS) ، مفلتر مختبرات لامبير البيولوجية هاتف: 7332500 Aliquot والتجميد عند الاستلام دجاج مضاد لل GFP مختبرات أفيس GFP-1020 استخدم عند التخفيف 1: 500 أرنب مضاد ل DsRed كلونتك 632496 استخدم عند التخفيف 1: 2000 ؛ يمكن التعرف على البروتينات الفلورية القائمة على DsRed (مثل mCherry و mStrawberry و tdTomato، إلخ.) الفأر المضاد للبروخياط دراسات التطور بنك الورم الهجين NC82 استخدم عند التخفيف 1: 100 ؛ سوف يصنف الهياكل النشطة قبل التشابك على الرغم من الدماغ الذبابة FITC مضاد للدجاج ثيرموفيشر العلمي SA1-7200 استخدم عند التخفيف 1: 250 أليكسا فلور 568 مضاد للأرانب تقنيات الحياة أ 11011 استخدم عند التخفيف 1: 250 Alexa Fluor 647 الجسم المضاد للفأر تقنيات الحياة أ21235 استخدم عند التخفيف 1: 250 كاشف Slowfade Gold المضاد للتلاشي تقنيات الحياة S36936 شرائح المجهر (25 × 75 × 1.0 مم) فيشر ساينتيك 12-550-143 غطاء زجاجي (22 × 22 مم) الكرة الأرضية العلمية 1404-15 ملقط دومون علم الأحياء الصف ، النمط 3 تيد بيلا 503 ريال استخدم في اليد غير المهيمنة ملقط دومون علم الأحياء ، النمط 5 تيد بيلا 505 ريال استخدم في اليد المهيمنة برنامج تحليل الصور LAS X لايكا برنامج تحليل الصور Imaris Bitplane

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Protein AggregatesDrosophila BrainsConfocal MicroscopyImage QuantificationFluorescent TaggingCo localization AnalysisFixative SolutionAntifade ReagentZ stack ImagingMutant Protein

Related Articles