$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.
< p class = "jove_title" >
1. تحضير الفأر للجراحة
- أخرج الماوس من قفص المنزل وقم بوزن (جم).
- ضع الفأر في غرفة تحريض الأيزوفلوران واضبط الأكسجين على 2 لتر / دقيقة ومبخر الأيزوفلوران على 5 للحث على مستوى جراحي للتخدير ، حوالي 3-5 دقائق. تأكد من تخدير الماوس بالكامل باستخدام منعكس قرصة إصبع القدم.
- عندما يتم تخدير الماوس بالكامل ، ضعه في إطار تجسيمي ، وقم بتأمين الأنف في مخروط الأنف ، المتصل بأنبوب بالأيزوفلوران. أدخل قضبان الأذن في قناة الأذن وشدها ، مع التأكد من استقرار الرأس.
- احلق الرأس من الأذن إلى الأذن ومن بين العينين إلى خلف الأذنين.
- عقم البشرة بمناديل متناوبة من كحول الأيزوبروبيل ومحلول اليود البيتادين ، 3 مرات لكل منهما.
- ضع دموعا اصطناعية على كلتا العينين لمنعهما من الجفاف أثناء العملية الجراحية.
< p class = "jove_title" >
2. الإجراء الجراحي
- راقب عمق التخدير عن طريق الضغط على إصبع القدم أو الذيل. يكون الفأر في المستوى الجراحي المناسب عندما لا تكون هناك استجابة ويكون التنفس بطيئا ومتساويا.
- قم بعمل شق جلدي طفيلي من خلف العينين مباشرة إلى ما بين الأذنين تقريبا بحركة واحدة ثابتة باستخدام شفرة مشرط رقم 11. حرك الجلد جانبا وقم بقص الجانب الأيمن باستخدام المرقئ.
- نظف جمجمة الغشاء المغطى باستخدام الجانب الباهت من المشرط رقم 11 وأدوات التطبيق ذات الرؤوس القطنية. اختياريا، امسح الجمجمة بقضيب قطني مغموس في محلول ملحي بنسبة 0.9٪. اتركيه ليجف تماما.
- باستخدام مسطرة صغيرة ، ضع علامة على الحد الأمامي لبضع القحف عند 1 مم ذيلية للخياطة الإكليلية والحافة اليسرى من حج القحف عند 1 مم جانبيا للخياطة السهمية (الشكل 1) بعلامة دائمة. ثم ضع علامة على الحدود اليمنى والذيلية لبضع القحف على بعد 4 مم من الغرز السهمية والإكليلية ، على التوالي (الشكل 1).
- باستخدام مثقاب 0.5 مم ، ابدأ في إجراء حج القحف عن طريق الحفر ببطء باتباع مخطط العلامة الدائم. تأكد من عدم اختراق الجمجمة تماما. اضغط برفق على القطعة المعزولة من العظم الجداري باستخدام ملقط رقم 5 ، ستفسح مناطق الضعف المجال للضغط. عندما يكون العظم الرقيق ضعيفا بدرجة كافية في جميع أنحاء المحيط ، تكون قطعة العظم جاهزة للإزالة.
ملاحظه: إذا واجه المحقق صعوبة في إزالة العظم في قطعة واحدة ، فهذا يشير إلى أن العظم لم يتم ترققه بشكل كاف أثناء الحفر. ضع في اعتبارك حفر الجمجمة بشكل أكبر في اللاحقة لتسهيل إزالة قطعة العظام بسهولة.
- باستخدام حقنة سعة 10 مل مزودة بإبرة 23 جم ، ضع كمية صغيرة من محلول ملحي 0.9٪ لامتصاص العظم المعزول والمنطقة المحفورة.
- قم بتوصيل ذراع المناور بالمعدات التجسيمية. قم بتوصيل شفرة مشرط جديدة رقم 11 بحامل المسبار بحيث يكون الجانب الحاد من الشفرة متجها بشكل مؤشر.
ملاحظه: على الرغم من أن الأنسجة المنقارية والذيلية تعاني من الحواف الحادة وغير الحادة للشفرة ، على التوالي ، إلا أن الضرر الميكانيكي الناجم عن الإصابة المخترقة يمكن مقارنته طوال مدى الآفة. لا نلاحظ أي اختلافات ملحوظة في السمات الرئيسية للداء الدبقي التفاعلي ، بما في ذلك تنظيم تعبير GFAP أو انتشاره ، بين الأقسام المنقارية والذيلية.
- مع إبقاء ذراع المعالج بعيدا عن الطريق ، ارفع العظم المعزول بعناية باستخدام ملقط بزاوية 5/45. أدخل طرف الملقط في جانب العظم المعزول وارفعه ، باستخدام الرافعة لسحب قطعة العظم المتبقية وراءها بحركة واحدة كاملة.
ملاحظه: احرص على عدم طعن الدماغ أو إزعاج الجافية الموجودة أسفل الجمجمة.
- خذ قطعة صغيرة من رغوة الجل المنقوعة القابلة للامتصاص وضعها على الدماغ المكشوف لمنعها من الجفاف وامتصاص أي دم قد يكون موجودا.
- بمجرد وضع رغوة الجل في مكانها ، قم بتأرجح ذراع المناور في مكانه واضبط الشفرة على مركز حج القحف فوق رغوة الجل. قم بإزالة رغوة الجل وخفض الشفرة حتى يلامس الطرف الجافية دون ثقب الجافة. ضع علامة على الإحداثيات الظهرية / البطنية باستخدام مقياس الورنية على الذراع الرأسية للجسم التجسيمي.
- باستخدام ذراع المناور ، قم بخفض الشفرة ببطء 3 مم في الدماغ. يتم تحقيق ذلك باستخدام علامات مقياس الورنية على ذراع المعالج. اترك الشفرة في مكانها لمدة 5-10 ثوان. حرك الذراع التجسيمية مع مرفق الشفرة المنقارية إلى الذيلية ثلاث مرات ، مما يسمح للشفرة بالوصول إلى الحدود المنقارية والذيلية لحج القحف قبل الانتقال إلى الطرف المقابل.
ملاحظه: لا تتم إزالة الجافية قبل إدخال الشفرة. على عكس جافية الفئران ، التي يبلغ سمكها ~ 80 ميكرومتر 7 ، فإن جافية الفأر أرق بكثير (بسمك بضع طبقات خلوية فقط) ولا تنتج مقاومة ملحوظة لشفرة المشرط أثناء الإدخال. استخدم شفرة مشرط جديدة لكل فأر للتأكد من أن كل يتلقى إصابة ثابتة.
- ارفع الذراع التجسيمية ببطء ، وقم بإزالة الشفرة من الدماغ. بعد إزالة الشفرة ، ضع على الفور قطعة أخرى من رغوة الجل على سطح الدماغ لامتصاص أي دم أو سائل زائد.
- في هذه الأثناء ، قم بإزالة الذراع التجسيمية وتخلص من شفرة المشرط رقم 11. بمجرد توقف النزيف ، قم بإزالة رغوة الجل.
- أغلق الجرح عن طريق خياطة الجلد بخيوط غير قابلة للامتصاص، مثل الإثيلون أو البرولين. يجب إزالة الغرز بعد 9-10 أيام من الجراحة.
- أعد الماوس إلى قفص منزله ، واسمح للماوس بالتعافي ببطء على وسادة التدفئة وراقب أي علامات للضيق. يحدث التعافي من التخدير الناجم عن الأيزوفلوران عادة في غضون 2-5 دقائق بعد إزالته من الأيزوفلوران. لا تترك دون رقابة حتى يستعيد الاستلقاء القصي.
- قم بإدارة 0.5-1 مل من محلول Ringer المرضع تحت الجلد لضمان الترطيب.
