تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.
< p class = "jove_title" >
1. رعاية
- استخدم ذكور C57BL / 6J من العمر 5 إلى 6 أسابيع (20-25 جم من الوزن) في هذه التجربة.
- حافظ على الفئران في دورة إضاءة / ظلام مدتها 12 ساعة / 12 ساعة ، وتأكد من حصولها على الطعام والماء بشكل مجاني. توفير نفس الكميات من الطعام والماء لكل من مجموعات الوسام وإصابات الدماغ الرضية طوال الدراسة.
- ابذل قصارى جهدك لتقليل آلام وعدم ارتياحها.
< ص الفئة = "jove_title" >
2. تحريض إصابات الدماغ الرضحية
- حقن الكيتامين (80-100 مجم / كجم) / زيلازين (10 مجم / كجم) IP للتخدير. اختبر عمق التخدير باستخدام منعكس العين أو رد فعل الألم. استخدم الدموع الاصطناعية أو مرهم العين المزلق لمنع العينين من الجفاف.
- بعد التخدير ، ضع الفأر في وضع الانبطاح. استخدم وسادة تسخين يتم التحكم في درجة حرارتها للحفاظ على درجة الحرارة عند 37 درجة مئوية أثناء الجراحة ولمدة 30 دقيقة بعد إصابات الدماغ الرضية.
- حلق شعر منطقة الشق.
- قم بتطهير فروة الرأس بنسبة 70٪ من الإيثانول باستخدام ثلاثة مقشرات متناوبة ، ثم شق فروة الرأس في مستوى سهمي.
- استخدم الملقط لسحب الشق على كلا الجانبين وفصل السمحاق قليلا.
- استخدم قلم تحديد لرسم دائرة (قطرها 3 مم) على المنطقة الجدارية اليمنى من الجمجمة ، على بعد 2 مم من خط الوسط.
- حفر الجمجمة مع المثقاب الكهربائي. تأكد من تشغيل هذه الخطوة بعناية لحماية الجافية من التلف.
- قم بإزالة السديلة العظمية وكشف نافذة عظمية صغيرة (قطرها 3 مم).
- ضع قنية إصابات بلاستيكية (القطر الداخلي = 2.5 مم ، الطول = 8 مم) فوق حج القحف وقم بتثبيت القنية في الجمجمة باستخدام أكريليك الأسنان.
- املأ القنية بكلوريد الصوديوم المعقم 0.9٪ (محلول ملحي عادي) باستخدام حقنة (5 مل) للتأكد من عدم وجود فقاعات في القنية.
- قم بتشغيل راسم الذبذبات ومكبر الصوت وتأكد من خلو أنبوب الضغط العالي لجهاز LFPI من فقاعات الهواء. اختبر الجهاز عن طريق توصيل حوالي 10 نبضات حتى يعطي إشارة ثابتة. اضبط زاوية موضع بدء البندول للوصول إلى شدة نبضة تبلغ حوالي 2.0 ضغط جوي.
- قم بتوصيل قنية الإصابة بجهاز LFPI. إحداث إصابة في الدماغ عن طريق الضغط على الزناد وتحرير البندول. بعد ذلك ، احصل على نبضة ونقلها إلى الجافية من خلال نظام الأنابيب المملوء بالسوائل المغلق بالكامل.
- قم بتشغيل الفئران في المجموعة الوهمية بنفس الإجراء الجراحي. لا تقم بإجراء LFPI.
