الكشف عن التوطين المشترك لمستقبلات الأوريكسين والقنب في أسماك الزرد البدينة التي يسببها النظام الغذائي

الملخص

المصدر: Imperatore، R.، et al. تحديد مستقبلات Orexin و endocannabinoid في أسماك الزرد البالغة باستخدام طرق الإيمونوبيروكسيداز والتألق المناعي. J. Vis. Exp. (2019).

يوضح هذا الفيديو بروتوكولا للتحقيق في التوطين المشترك لمستقبلات الأوريكسين والقنب في أنسجة دماغ السمنة الزرد البالغة الطبيعية والناجمة عن النظام الغذائي (DIO) باستخدام التألق المناعي.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على عينات حيوانية والموافقة عليها من قبل لجنة المراجعة الأخلاقية الحيوانية المناسبة.

فئة

1. بروتوكول التألق المناعي

1. تشريح الأنسجة
   1. قم بالتضحية بسمك الزرد عن طريق الغمر في الماء المثلج (5 أجزاء من الثلج / 1 جزء من الماء ، 4 درجات مئوية) ؛ اتركها حتى توقف كل حركة لضمان الموت بسبب نقص الأكسجة.
   2. قم بإزالة الرأس بشفرة حلاقة. قم بإزالة الأنسجة الرخوة من الجانب البطني للجمجمة باستخدام ملقط. افتح الجمجمة وأزل العظم من الجانب البطني من الدماغ. إزالة الجلد وعظام الجمجمة من الجانب الظهري من الدماغ. إزالة الدماغ.
2. تثبيت....

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات مكافحة CB1 أبكام أب23703 مضاد OX-2R سانتا كروز SC-8074 مضاد أوكسا سانتا كروز SC8070 كرايوستات نظام لايكا الحيوي CM3050S دابي سيجما ألدريتش 32670 الحمار المضاد للماعز الفلور أليكسا 488 الأجسام المضادة الثانوية المترافقة ثيرمو فيشر أ 11055 الحمار المضاد للماعز الأجسام المضادة الثانوية المترافقة أليكسا فلور 594 ثيرمو فيشر أ 11058 الحمار المضاد للأرانب أليكسا فلور 488 الأجسام المضادة الثانوية المترافقة ثيرمو فيشر أ 21206 الحمار المضاد للأرانب الأجسام المضادة الثانوية المترافقة Alexa 594 ثيرمو فيشر أ 21207 الإيثانول المطلق VWR 2,08,21,330 مركب القسم المجمد نظام لايكا الحيوي FSC 22 وسائط القسم المجمد حمض الهيدروكلوريك VWR 2,02,52,290 ImmPACT DAB مختبر النواقلات سك 4105 مجهر نظام لايكا الحيوي DMI6000 ميكروتوم نظام لايكا الحيوي RM2125RT نا₂HPO₄ سيجما ألدريتش S9763 كلوريد الصوديوم سيجما ألدريتش إس 7653 NaH₂PO₄H₂O سيجما ألدريتش إس 9638 هيدروكسيد الصوديوميوم سيجما ألدريتش إس 8045 مصل الحمار العادي سيجما ألدريتش د9663 مصل الأرنب العادي مختبر النواقلات إس -5000 بارافورمالديد سيجما ألدريتش ص 6148 تريتون X-100 فلوكا التحليلية 93420 تريزما سيجما ألدريتش [ت1503] مجموعة VectaStain Elite ABC مختبر النواقلات PK6100