تحريض Cre-LoxP بوساطة التشوهات الكهفية الدماغية في نموذج الفأر

الملخص

المصدر: Choi, J.P., et al. التصوير التحريضي والتصوير المقطعي المحوسب الدقيق للتشوهات الكهفية الدماغية في نموذج الفأر. J. Vis. Exp. (2017)

في هذا الفيديو ، يتم استخدام جرو فأر معدل وراثيا يحمل جين Ccm2 محاط بمواقع loxP و Cre recombinase المدمجة في مستقبلات هرمون الاستروجين للحث على تشوهات كهفية دماغية (CCMs). يؤدي إعطاء 4-هيدروكسي تاموكسيفين إلى تنشيط Cre في الخلايا البطانية ، مما يؤدي إلى حذف Ccm2 وتشكيل CCMs في الدماغ.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

< p class = "jove_title" >1. تحريض التشوهات الكهفية الدماغية أو CCMs في نماذج الفئران

1. عبر Cdh5-CreErt2 ؛ Ccm2fl / fl الفئران مع Ccm2fl / fl لتوليد فضلات مع Cdh5-CreErt2 ؛ Ccm2fl / fl (Ccm2iECKO) الجراء وعناصر التحكم في القمامة (Ccm2fl / fl). تم وصف Cdh5-CreErt2 و Ccm2fl / fl سابقا19.
2. قم بإذابة 4HT في 100٪ من الإيثانول وتخزينه عند -80 درجة مئوية في كميات من 30 ميكرولتر 4-هيدروكسي تاموكسيفين (4HT) (التركيز: 10 مجم / مل). في يوم الاستخدام ، قم بتخفيف 4HT في زيت الذرة (0.5 مجم / مل).
3. حقن 50 ميكرولتر من 4HT (0.5 مجم / مل) داخل المعدة لصغار حديثي الولادة عند P1 للحث على آفات CCM التجريبية باستخدام حقنة الأنسولين.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات 4-هيدروكسي تاموكسيفين سيجما ألدريتش H6278 لتنشيط Cdh5-CreErt2 زيت الذرة سيجما ألدريتش C8267-500 مل لتخفيف 4-هيدروكسي تاموكسيفين حقنة الأنسولين