إنشاء نموذج فأر لإصابات الدماغ الرضحية باستخدام جهاز اصطدام

Abstract

المصدر: Schwulst ، S. J. et al. نموذج الفئران للتأثير القشري المتحكم فيه لتحريض إصابات الدماغ الرضحية. J. Vis. Exp. (2019)

يوضح هذا الفيديو إجراء إحداث إصابات الدماغ الرضحية (TBI) في نموذج الفأر. يتم أخذ فأر مخدر بجمجمة مكشوفة لإنشاء فتحة في الجمجمة ، ثم يتم إحداث إصابة قشرية خاضعة للرقابة باستخدام جهاز تأثير. تؤدي الإصابة إلى تلف أنسجة المخ ، مما يتسبب في ضعف الوظيفة الإدراكية والتنسيق الحركي.

Protocol

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

< ص الفئة = "jove_title" >1. تحفيز التخدير

1. تخدير الفأر بالكيتامين (125 ملغم/كغ) والزيلازين (10 ملغ/كغ) المحقون داخل الصفاق.

< p class = "jove_title" >2. مراقبة العلامات الحيوية كل 15 دقيقة

1. مراقبة درجة الحرارة ومعدل التنفس ولون البشرة. يجب أن يشعر الماوس بالدفء عند لمسه. يجب أن يظهر الجلد باللون الوردي ومنقوفا جيدا. يجب أن يتراوح معدل التنفس بين 50 و 70 نفسا في الدقيقة.

فئة

3. إجراءات ما قبل الجراحة

1. قم بوزن جميع الفئران في اليوم السابق لتحريض الإصابة.
2. تعقيم مجموعة واحدة من الأدوات الجراحية عن طريق التعقيم لكل موضوع تجريبي. تعقيم الجهاز المؤثر قبل الاستخدام.
3. قم بإعداد قفص استرداد عن طريق وضع قفص نظيف فوق وسادة تسخين كهربائية مضبوطة على إعداد "منخفض" ووضعها بطريقة تجعل الفئران تتحرك بعيدا عن الحرارة بمجرد أن تكون متنقلة.
4. قم بإعداد غرفة العمليات داخل غطاء تدفق رقائقي معقم.
   1. ضع إطار التشغيل التجسيمي.
   2. قم بتوصيل الجهاز المؤثر بالإطار التجسيمي.
   3. اضبط جهاز التشغيل بالمعلمات الميكانيكية الحيوية المطلوبة للسرعة ووقت السكون.
      ملاحظه: في هذا البروتوكول ، يتم وصف إصابة شديدة في الدماغ باستخدام طرف تأثير قطره 3 مم عن طريق استئصال التقرن الكهربائي بقطر 5 مم مع ضبط السرعة عند 2.5 م / ث ووقت سكون يبلغ 0.1 ثانية. يمكن استخدام مجموعة واسعة من المعلمات الميكانيكية الحيوية للحث على الطيف الكامل لإصابات الدماغ الرضية.
5. ارتد معدات الحماية الشخصية الجديدة والقفازات المعقمة.
6. احلق الفراء من موقع العملية باستخدام المقصات الكهربائية.
7. ضع مرهم بصري واقي على عيون الفأر لمنع إصابة القرنية وتجفيفها.
8. ضع الماوس في غرفة العمليات.
9. تحضير الجلد بمقشر جراحي قائم على اليود بالتناوب مع الكحول ثلاث مرات.

< p class = "jove_title" >4. تطبيق التأثير القشري المتحكم فيه

1. شق فروة الرأس 1 سم في خط الوسط بمشرط يكشف الجمجمة.
2. ضع الماوس داخل إطار تشغيل تجسيمي عن طريق تأمين العظام الصدغية الثنائية بين قضبان الأذن المصغرة وقفل القواطع داخل مشبك قاطع ، مما يؤدي إلى إنشاء ثبات ثابت من ثلاث نقاط على رأس الماوس.
3. اسحب فروة الرأس بعيدا عن موقع الجراحة باستخدام ملقط الرقيق أو الملقط القفل لضمان عدم ملامسة فروة الرأس لقمة الحفر أثناء استئصال التقرن المزمن.
4. تحديد الغرز السهمية والإكليلية على الجمجمة المكشوفة.
   ملاحظه: يركز هذا البروتوكول على استئصال التقرن 2 مم على يسار الخيط السهمي و 2 مم منقاري للخياطة الإكليلية.
5. قم بإجراء استئصال التقرن باستخدام مثقاب باستخدام مثقاب تريفين.
   1. لإجراء استئصال التقرن ، قم أولا بتنشيط المثقاب بأقصى سرعة ثم قم بتطبيق مثقاب التريفين بشكل عمودي على الجمجمة في موقع استئصال التغريب.
   2. ضع ضغطا لطيفا ومتساويا على المثقاب بمجرد ملامسة الجمجمة. سيشعر ب "عطاء" طفيف بمجرد اختراق المثقاب عبر الجمجمة. لا تخترق الجافية الأساسية.
      ملاحظه: يستخدم هذا البروتوكول مثقاب تريفين 5 مم لإجراء استئصال الترانيكتوم.
6. استخدم ملقطا وإبرة صغيرة تحت الجلد لإزالة السديلة العظمية ، مما يؤدي إلى تعريض الأم الجافية الأساسية بالكامل.
7. قم بتدوير طرف الاصطدام في مجال التشغيل وخفضه حتى يتلامس مع الأم الجافية المكشوفة. بمجرد إجراء الاتصال ، سيقوم مستشعر التلامس الخاص بالجهاز بإصدار نغمة مسموعة لتنبيه الجراح بأنه تم إجراء الاتصال. سيحدد هذا نقطة الصفر التي يتم من خلالها تعيين عمق التشوه.
   ملاحظه: يستخدم هذا البروتوكول طرفا تأثيريا مقاس 3 مم لإحداث إصابة خطيرة. يمكن استخدام أطراف صغيرة تصل إلى 1 مم لتطبيق إصابة موضعية أكثر.
8. اسحب طرف التأثير واضبط عمق التأثير المطلوب عن طريق خفض موضع الاصطدام على الإطار التجسيمي.
   ملاحظه: في هذا البروتوكول ، نصف إصابة خطيرة عن طريق ضبط عمق التشوه على 2 مم.
9. ضع الإصابة عن طريق تنشيط الاصطدام على جهاز التشغيل.
10. قم بتدوير جهاز التأثير خارج الحقل وإزالة من الإطار التجسيمي.

فئة

5. إغلاق موقع الجراحة

1. السيطرة على النزيف من الجمجمة والسطح القشري المصاب بضغط مباشر من قضيب قطني معقم.
2. جفف الجمجمة باستخدام قضيب قطني معقم.
3. أغلق فروة الرأس فوق استئصال التقرن باستخدام مادة لاصقة جراحية متوفرة تجاريا أو خياطة أحادية الشعيرات.
   ملاحظه: في هذا البروتوكول ، يتم استخدام مادة لاصقة جراحية بيطرية لإغلاق فروة الرأس. لا يتم استبدال السديلة العظمية ويتم التخلص منها.

< p class = "jove_title" >6. رعاية ومراقبة ما بعد الجراحة

1. تطبيق التسكين بعد الجراحة (على سبيل المثال، الإفراج المستمر عن البوبرينورفين 0.1-0.5 ملغم/كغ تحت الجلد مع توفير 72 ساعة من التسكين المستمر).
2. ضع في وضع استرداد الاستلقاء الجانبي في قفص نظيف ودافئ مسبقا.
3. راقب حتى تستيقظ ومتحركة ، ثم أعد كل فأر إلى قفص منزله.
4. ضمان الوصول الحر إلى الطعام والماء. عادة ما يستأنف تناول الطعام والماء العادي في غضون ساعة إلى ساعتين بعد الإصابة.
5. قم بقياس وزن الجسم كل ثلاثة أيام طوال التجربة.

Materials