$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.
< p class = "jove_title" >
1. تلقيح الفيروسات
- تعقيم حقنة الحقن
- قم بإزالة غطاء حقنة الأنسولين. أضف أنابيب البولي إيثيلين كطوق حول الإبرة لضمان عمق حقن مناسب يبلغ 2.5 مم. اغمر المحقنة في الإيثانول لمدة 30 دقيقة. ضع المحقنة تحت ضوء الأشعة فوق البنفسجية لمدة 30 دقيقة.
- ضع الغطاء مرة أخرى على الإبرة. لف المحقنة في كيس معقم وقم بإغلاقها. ملصق بتاريخ التحضير.
- حقن الفيروسات
- احصل على حصص من سلالة دانيال من TMEV من الفريزر -80 درجة مئوية. قم بإذابة الفيروس واحتفظ به على الجليد. تجنب إذابة الفيروس وإعادة تجميده. قم بتحميل المحقنة بتعليق الفيروس (3 × 105 وحدة تشكيل البلاك [PFU] المخففة في 20 ميكرولتر من المحلول الملحي المخزن بالفوسفات [PBS] أو وسط ثقافة النسر المعدل من Dulbecco [DMEM]).
تحذير: الفيروس معدي للفئران ولكن ليس للبشر.
- نظف المقعد بمطهر واعمل تحت ممتص الدخانة. التطعيم الفيروسي ليس معقما ولكنه نظيف قدر الإمكان.
- انقل الفأر إلى غرفة تحريض التخدير واستخدم 2٪ من الأيزوفلوران في الأكسجين للحث على التخدير. يستغرق الوصول إلى التسامح الجراحي بضع دقائق. اضبط التركيز بناء على تنفس وعمق التخدير.
- انقل الفأر المخدر من صندوق التخدير أسفل الغطاء. تحقق من التحمل الجراحي ، على سبيل المثال ، عن طريق قرصة إصبع القدم. يتم تنفيذ الإجراء بأكمله في أقل من 30 ثانية ، لذلك لا يحتاج إلى استنشاق الأيزوفلوران أثناء الحقن. أضف مرهم العين لمنع جفاف القرنية.
- نظف رأس بقطعة كحول. قم بإمالة رأس الماوس قليلا إلى اليسار بحيث يشير موقع الحقن لأعلى.
- اسحب الجلد للخلف قليلا ، وأدخل الإبرة في الرأس ، وحقن 20 ميكرولتر داخل القشرة إلى عمق 2.5 مم في المنطقة الصدغية من نصف الكرة الأيمن (الخلفي والإنسي للعين اليمنى).
- قم بإجراء الحقن من جانب واحد في نفس نصف الكرة الأرضية في جميع. استخدم العين والأذن كمعالم لموقع القشرة الجدارية. تم التحقق من التنسيب مسبقا من الناحية النسيجية. انظر الشكل 1. إحداثيات الحقن وفقا للحقن التجسيمي فيما يتعلق بالبريجما هي −2.0 (AP); +3.0 (مل); -1.5 (DV).
- اترك المحقنة في مكانها لمدة 5-15 ثانية ، اكتب ما إذا كان هناك أي تسرب من الحقن أو إذا شوهدت فقاعات هواء - في هذه الحالة ، قم بإعداد حقنة جديدة. عند سحب المحقنة بعناية ، قم بتدويرها قليلا. ضع مرهم العين لمنع الجفاف أثناء التخدير.
- اختياري: قم بترميز على الذيل أو الأذن اعتمادا على الإجراءات المحلية (اختياري ولكنه سهل لأن فاقد الوعي).
- انقل إلى قفص جديد ، يتم وضعه نصف / نصف وسادة تسخين (35-40 درجة مئوية) أثناء التعافي من التخدير. لا تترك دون رقابة حتى تستعيد وعيها الكافي للحفاظ على الاستلقاء القصي.
ملاحظه: يمكن إيواء مرة أخرى بعد الشفاء (لا يتم خلط المصابة بالحيوانات المصابة بالحيوانات المصابة الوهمية). لا ينبغي إيواء الفئران المصابة في نفس الغرفة مع الفئران غير المصابة.
- تتبع وزن الفئران في أول 7 أيام بعد الإصابة لأنها تفقد الوزن بعد الإصابة وقد تتطلب تغذية إضافية.
< p class = "jove_title" >
2. مراقبة نوبات النوبات الناجمة عن المناولة
- قم بإجراء هذا الإجراء بواسطة مجرب أعمى عن العلاج. أحضر كل الأقفاص إلى مقاعد البدلاء. راقب بحثا عن النوبات 2x يوميا خلال مرحلة الضوء.
- سجل نشاط النوبة بمقياس راسين المعدل: 0 = لا تغيير في السلوك ، 1 = حركات الفم والوجه ، 2 = إيماءة الرأس ، 3 = كلونوس الطرف الأمامي من جانب واحد ، 4 = استنساخ الطرف الأمامي الثنائي مع التربية ، 5 = النشاط المنشط الرمعي المعمم مع فقدان الوضعي ، القفز في بعض الأحيان ، 6 = القفز المطول والمفرط وفرط النشاط. الإبلاغ عن عدد النوبات وشدتها.
- حرك قلما عبر القفص لإحداث بعض الضوضاء.
- انقل كل إلى صندوق آخر وعودة.
- هز القفص برفق باستخدام حركة ذهابا وإيابا ، مع الحرص على عدم هز القفص بقوة بحيث تصطدم بجوانب القفص أو الجزء العلوي منه وتتعرض لخطر الإصابة الجسدية.
- راقب جميع الموجودة في القفص بحثا عن النوبات. في أي وقت ، إذا أصيب الفأر بنوبة صرع ، فقم بنقله مرة أخرى إلى قفص المنزل واكتب مستوى النوبة دون مزيد من تحفيز النوبة عن طريق الضوضاء أو المناولة.
- بالنسبة للحيوانات التي لم تمسك تلقائيا أو بعد اهتزاز القفص اللطيف ، قم بحدوث نوبات عن طريق التعامل بشكل أكثر كثافة: اقلب الماوس بحذر عن طريق قلبه في ذيله من اليسار إلى اليمين.
ملاحظه: المصابة بنوبات شديدة الإثارة ويمكن أن تكون ثاقبة.
- راقب كل لسلوك النوبات مرة أخرى. كرر العملية للأقفاص اللاحقة.
