تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.
< p class = "jove_title" >
1. التحضير لمقايسة النوبة الناجمة عن الحرارة
- قم بتشغيل زر التشغيل في حجرة الحرارة ، متبوعا بزر التشغيل الحراري.
- اضبط درجة حرارة غرفة الحرارة على 50 درجة مئوية باستخدام لوحة المفاتيح الموجودة على وحدة التحكم في درجة الحرارة الرقمية.
- انتظر لمدة 1 ساعة على الأقل لتسخين الغرفة مسبقا إلى 50 درجة مئوية قبل إدخال الماوس الأول في الغرفة. يضمن التسخين المسبق تسخينا موحدا داخل الغرفة.
- قم بتبطين أرضية غرفة تسخين الماوس بفراش قطعة خبز.
- قم بتركيب كاميرا تسجيل فيديو أمام غرفة الحرارة لتسجيل كل تجربة لفحص النوبات الناجمة عن الحرارة.
- قم بتبطين طبق بتري بقطر 140 مم بطبقات سميكة من المناديل الورقية وضعه على الثلج ليكون بمثابة وسادة تبريد.
ملاحظه: في نهاية الفحص ، سيتم نقل الفئران الفردية إلى وسادة التبريد المبردة مسبقا للمساعدة في خفض ارتفاع درجة حرارة الجسم.
< p class = "jove_title" >
2. تحضير الفأر لمقايسة النوبات الناجمة عن الحرارة
- حدد 10 فئران بالغة (P30-P40) ، 5 منها تحمل الطفرة المسببة للصرع ، و 5 من رفقاء القمامة من النوع البري لمقايسة فحص النوبات الناجمة عن الحرارة.
ملاحظه: الفئران البرية ، التي لا تؤوي أي طفرة مسببة للصرع ، لا تظهر نوبات ناتجة عن الحرارة عند درجات حرارة أقل من 44 درجة مئوية وتعمل كمجموعة تحكم.
- قم بوزن كل فأر لاستخدامه في فحص الفحص وسجل وزن جسمه. يجب استخدام الفئران التي تزن 15 جراما أو أكثر فقط في الفحص.
- قم بفحص ماوس واحد في كل مرة في غرفة تسخين الماوس.
قم - بتخدير الفأر لفترة وجيزة لمدة 10-15 ثانية باستخدام بضع قطرات من الأيزوفلوران في قاع جرة الجرس.
- أخرج من جرة الجرس وضعه على منشفة ورقية.
- تأكد من تخدير الماوس تماما عن طريق التحقق من أن الماوس لا يستجيب لقرص إصبع القدم الضار.
- قم بتغطية الطرف المعدني لمسبار درجة حرارة المستقيم بمادة تشحيم (مثل الفازلين) وأدخله برفق في الماوس على عمق أقل من أو يساوي 2 سم.
- قم بتثبيت مسبار المستقيم على ذيل الماوس بشريط لاصق حتى لا يخرج المسبار أثناء الفحص.
ملاحظه: بدلا من ذلك ، ضع في مخروط تقييد الفأر وأدخل مسبار درجة حرارة المستقيم. قم بتثبيته عن طريق لصقه على الذيل.
- تأكد من توصيل مسبار المستقيم بمقياس متعدد يعرض درجة حرارة الجسم الداخلية للماوس.
- ضع في قفص جديد مبطن بفراش قطعة خبز ، أي قفص الاسترداد.
- ابدأ المؤقت وانتظر لمدة 5 دقائق. راقب الماوس حتى يتعافى تماما من التخدير ويصبح الماوس نشطا ومستفيدا.
- في نفس الوقت ، راقب درجة حرارة الجسم الأساسية للماوس حتى تستقر عند 35-36 درجة مئوية.
- في نهاية 5 دقائق ، لاحظ درجة حرارة جسم الفأر. هذه هي درجة حرارة الجسم الأولية في الوقت "0" دقيقة
ملاحظه: إذا كانت درجة حرارة جسم الفأر الأساسية أقل من 35 درجة مئوية ، فانتظر وقتا إضافيا حتى يتعافى من انخفاض حرارة الجسم الناجم عن التخدير.
- انقل الماوس الفردي بسرعة إلى غرفة الماوس المسخنة مسبقا. هذا يمثل بداية تجربة التجربة. يتم فحص ماوس واحد فقط في وقت معين.
< p class = "jove_title" >
3. مقايسة النوبات الناجمة عن الحرارة
- بعد وضع الماوس برفق على أرضية غرفة تسخين الماوس المسخنة مسبقا ، أغلق باب زجاج شبكي وابدأ تشغيل الكاميرا لتسجيل التجربة بالفيديو.
- ابدأ تشغيل ساعة الإيقاف. سجل درجة حرارة جسم الفأر من مقياس حرارة المستقيم على فترات 1 دقيقة طوال مدة التجربة.
- على فترات منتظمة ، قم بزيادة درجة حرارة غرفة حرارة الماوس بحيث تزيد درجة حرارة جسم الماوس بمعدل 0.25-0.5 درجة مئوية / دقيقة < br / >
ملاحظه: يمكن أن تؤدي الزيادات السريعة في درجة حرارة الجسم إلى ضربة شمس أو الوفاة ويجب تجنبها.
- باتباع هذا البروتوكول ، قم بزيادة درجة حرارة غرفة تسخين الماوس بمقدار 5 درجات مئوية كل 10 دقائق كما هو موضح في الشكل 1 أ.
- عند 9.5 دقيقة ، اضبط درجة حرارة غرفة الحرارة على 55 درجة مئوية ، لتثبيت درجة حرارة غرفة الحرارة إلى 55 درجة مئوية بحلول الدقيقة العاشرة كما هو موضح في شاشة درجة الحرارة الرقمية.
- وبالمثل ، قم بزيادة درجة الحرارة إلى 60 درجة مئوية عند 19.5 دقيقة لتثبيت درجة حرارة غرفة الحرارة إلى 60 درجة مئوية بحلول الدقيقة 20. تستمر كل تجربة فحص للنوبات لمدة 30 دقيقة.
- إذا أصيب الفأر بنوبة صرع (ينطق ، أو يظهر إيماءة رأسه ، أو رمص الطرف الأمامي ، أو تمديد الطرف الخلفي ، أو يسقط على جانبه ، أو يعاني من تشنجات منشطة / رمعية معممة) ، فقم بتسجيل المعلومات التالية.
- سجل درجة حرارة جسم الفأر أثناء النوبة (درجة حرارة عتبة النوبة) من مقياس حرارة المستقيم.
- سجل خصائص سلوك النوبة مثل إيماءة الرأس ، ورم الطرف الأمامي ، وتمديد الطرف الخلفي ، والسقوط على الجانب ، و / أو النوبات المنشطة / الرمعية المعممة (GTCS) التي يعرضها الفأر.
- التقط الماوس بسرعة ولكن برفق من الغرفة وضعه على وسادة التبريد المعدة في الخطوة 1.6.
ملاحظه: إذا كان الفأر يعاني من نوبات مقياس راسين 5 ويظهر قفزا غير منضبط ، فقد يكون من الصعب التقاط من غرفة الحرارة ونقله إلى وسادة التبريد بالخارج. ومع ذلك ، فإن النوبة النموذجية الناجمة عن الحرارة تستمر ما بين 30 ثانية إلى 60 ثانية ، وبالتالي ، يجب إخراج الفأر من غرفة الحرارة ووضعه على وسادة التبريد في غضون 60 ثانية من بدء نوبة الاستيلاء الناجمة عن الحرارة.
- انتظر حتى تنخفض درجة حرارة جسم الفأر إلى 36-37 درجة مئوية ، قبل نقله إلى قفص الاسترداد. يتم وضع فأر واحد فقط في قفص الاسترداد في كل مرة.
ملاحظه: لا تخلط الفئران التي لم يتم استخدامها بعد للفحص الناجم عن الحرارة مع الفأر الذي اختبر بالفعل تجربة النوبات الناجمة عن الحرارة.
- قم بقص الشريط اللاصق بين ذيل الماوس وسلك مسبار المستقيم بمقص لإزالة مسبار المستقيم من الماوس.
- امسح الطرف المعدني لمسبار المستقيم بمناديل كحولية ومناديل رخوة بنسبة 70٪ لإبقائه جاهزا للتجربة التالية.
- استمر في مراقبة الفأر في قفص الاسترداد حتى يستأنف نشاطه الطبيعي (المشي ، الاستمالة ، إلخ) ، قبل إعادة الفأر إلى قفص منزله. يمثل هذا نهاية تجربة التجربة لهذا الماوس.
- سجل حالة بعد الفحص على قيد الحياة وتعافى من جلسة الاختبار أو ميتا. يمكن أن تؤدي النوبات عالية الشدة التي تنطوي على قفز غير منضبط ونوبات منشطة / رمعية معممة في بعض الأحيان إلى موت الفأر.
- إذا لم يتعرض الفأر لنوبات ناتجة عن الحرارة خلال فترة المراقبة البالغة 30 دقيقة أو وصلت درجة حرارة جسم الماوس إلى 44 درجة مئوية ، فقم بإزالة الماوس من غرفة الحرارة وضعه على وسادة التبريد حتى تعود درجة حرارة جسم الماوس إلى 36-37 درجة مئوية.
- أعد ضبط درجة حرارة غرفة تسخين الماوس إلى 50 درجة مئوية واتركها تتوازن حتى تظهر درجة حرارة العرض على وحدة التحكم في درجة الحرارة الرقمية 50 درجة مئوية.
- قم بتغيير فراش قطعة خبز بين تجارب الماوس الفردية.
