تلطيخ كيميائي مناعي لبروتين S-100 في أقسام خزعة شفط المستقيم البشري

الملخص

المصدر: Chi, S., Fang, et al. تشخيص مرض هيرشسبرونغ عن طريق خزعات شفط المستقيم المناعية لكالريتينين والبروتين S100 ومنتج جين البروتين 9.5. J. Vis. Exp. (2019)

يوضح هذا الفيديو التلوين الكيميائي المناعي لبروتين S-100 في أقسام خزعة شفط المستقيم. يتم حظر الأقسام المسترجعة بالمستضد ومعالجتها بالأجسام المضادة الأولية ، تليها الأجسام المضادة الثانوية ضد S-100 ، وهي علامة على مرض هيرشسبرونج. تضاف الركيزة الكروموجينيك لتلطيخ الخلايا المستهدفة. يتم تجفيف العينات وتركيبها قبل تصورها تحت المجهر.

البروتوكول

< p class = "jove_title" >1. تحضير أقسام خزعات شفط المستقيم (RSB)

1. ضع خزعات شفط المستقيم في 4٪ بارافورمالدهيد لمدة 6 ساعات لإصلاح الأنسجة. استخدم حجما مثبتا 5 مرات أكثر من حجم الأنسجة.
2. تجفيف الأنسجة باستخدام مجفف الأنسجة المرضية لمدة 11 ساعة. تتكون العملية المبرمجة بأكملها من الخطوات الخمس التالية:
   1. ضع الأنسجة في الفورمالديهايد وقم بإصلاحها لمدة 1 ساعة.
   2. ضع الأنسجة في 75٪ إيثانول لمدة 4 ساعات.
   3. ضع الأنسجة في الإيثانول المطلق (تغييران ، 1 ساعة لكل منهما).
   4. ضع الأنسجة في الإيثانول المطلق (تغييران ، 30 دقيقة لكل منهما).
   5. ضع الأنسجة في الزيلين (ثلاثة تغييرات ، 1 ساعة لكل منهما).

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
الجسم المضاد كالريتينين	MXB Biotechnologies	MAB-0716 170416405c	الجسم المضاد: الجسم المضاد الأساسي
الجسم المضاد S-100	MXB Biotechnologies	كيت-0007	الجسم المضاد: الجسم المضاد الأساسي
الجسم المضاد PGP9.5	شنغهاي الأجسام المضادة لونغ آيلاند المحدودة	R-0457-03	الجسم المضاد: الجسم المضاد الأساسي
كاشف المحسن	MXB Biotechnologies	KIT-9902-A 170416405a	الجسم المضاد: الجسم المضاد الثانوي A
الماعز المضاد للأرانب / الفأر IgG المضاد الثانوي	MXB Biotechnologies	كيت آي تي 9902 ب	الجسم المضاد: الجسم المضاد الثانوي B
مجموعة تلطيخ DAB (تحتوي على الكاشف A و B و C)	MXB Biotechnologies	DAB-0031	طقم تلطيخ
حاضنة حرارة	شنغهاي yiheng أداة المحدودة	DHP-9082	أداة
نظام خزعة المستقيم بالشفط Rbi2	Aus Systems Pty Ltd, جنوب أستراليا, أستراليا	CP1200 HP1000 SS1000	أداة
ميكروتوم	لايكا	leica RM2016	أداة
حامض الستريك سترات الصوديوم عازلة (100X)	MXB Biotechnologies	MVS-0101	Antigen Retrieval Buffer
مجفف الأنسجة المرضية	ووهان جونجي الالكترونية المحدودة	JT-12F	أداة