إنشاء نموذج نوبات الصرع الناجم عن البنتيلينتيترازول في الفئران

الملخص

المصدر: شيمادا، ت.، وآخرون: نموذج الفأر الناجم عن البنتيلينتيترازول. J. Vis. Exp. (2018).

يوضح هذا الفيديو عملية إحداث الصرع في الفئران باستخدام حقن البنتيلين تترازول (PTZ) ، وهو مضاد لمستقبلات GABA-A. يؤدي الإعطاء المتكرر داخل الصفاق ل PTZ إلى تقليل عتبة النوبات تدريجيا عن طريق تثبيط تدفق أيونات الكلوريد ، وتعطيل النقل العصبي المثبط ، ويؤدي إلى فرط الاستثارة في الخلايا العصبية التي تؤدي إلى النوبات. تؤدي هذه العملية إلى إشعال وتطور النوبات التلقائية ، التي تحاكي الصرع المزمن.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل اللجنة المؤسسية المحلية لرعاية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

1. تحضير Pentylenetetrazole (PTZ)

1. قم بإذابة 2 مجم / مل PTZ في معقم 0.9٪ (وزن / حجم) كلوريد الصوديوم. تحضير PTZ في يوم الاستخدام.

2. حقن PTZ

1. قم بإجراء جميع التجارب بين الساعة 9:00 صباحا و 12:00 ظهرا.
2. قياس وزن جسم.
3. ضع في غرفة المراقبة للتعويد.
4. خلال فترة التعود (3 دقائق) ، احسب حجم محلول PTZ للحقن بناء على وزن جسم وجرعة الحقن المحددة مسبقا.
   ملاحظة: على سبيل المثال ، عند استخدام 35 مجم / كجم PTZ ، يلزم 0.875 مجم من PTZ لماوس يزن 25 جم (35 مجم / كجم × 0.025 كجم = 0.875 مجم). لذلك ، يجب حقن 437.5 ميكرولتر من محلول PTZ 2 مجم / مل (0.875 مجم / 2 مجم / مل = 0.4375 مل). تعتمد جرعة حقن PTZ على النمط الجيني للفأر والسلالة. بالنسبة للفئران C57BL / 6 من النوع البري ، يوصى بجرعة 30-35 مجم PTZ / كجم من وزن الجسم للتجربة الأولى. تعتمد الحساسية ل PTZ على سلالة الماوس المستخدمة. تختلف جرعة الحقن حسب الغرض من التجربة.
5. حقن PTZ داخل الصفاق بحقنة سعة 1 مل متصلة بإبرة قياس 27 في الربع الأيسر أو الأيمن من بطن. تجنب الحقن في خط الوسط.
   1. تجنب الحقن المتكرر في نفس الموضع.
6. راقب سلوكيات لمدة 30 دقيقة بعد إعطاء PTZ ( الشكل 1 أ ) وقم بتصنيف وتسجيل السلوك غير الطبيعي كما هو موضح أدناه. إذا أمكن ، احتفظ بالحيوانات تحت الملاحظة لمدة 24 ساعة ، أو على الأقل 6-10 ساعات إضافية بعد الحقن ، خاصة بمجرد أن تصل درجة شدة النوبة إلى 3 أو أعلى.
   1. لاحظ أي نوبات خفيفة أو تغيرات سلوكية في بعد فترة المراقبة البالغة 30 دقيقة. قد تعالج فترة الملاحظة المطولة هذه تأثيرا مهما وكاملا بشكل خاص لجرعة شبه متشنجة من PTZ في توليد النوبات المزمنة غير المبررة في الصرع.
   2. بالإضافة إلى ذلك ، قم بقياس مدة النوبة لكل نوبة ملحوظة حيث أن التغيرات في مدة النوبة تتعلق بشدة النوبة. علاوة على ذلك ، فإن زمن انتقال النوبة الأولى بعد حقن PTZ هو إجراء مهم آخر يجب جمعه. تعد مراقبة تكرار النوبة ومدتها وزمن الوصول أمرا بالغ الأهمية لأي دراسات جزيئية بعد النوبة.
7. حقن PTZ كل يومين ( الشكل 1 أ ). يعتمد عدد الحقن على الهدف من التجربة. الأمثلة التمثيلية هي كما يلي.
   1. لتوليد مشتعلة تماما ، بمجرد أن يتعرض لنوبة صرع بدرجة 5 (نوبة منشطة رمعية) ، قم بإنهاء الحقن في غضون ثلاث إدارات إضافية. في هذه الحالة, زيادة جرعة الحقن إذا لم تزيد درجة النوبة لثلاث إدارات متتالية. يمكن لكل تلقي عدد وجرعة مختلفة من حقن PTZ.
   2. تحديد عدد وجرعة حقن PTZ في كل حالة لتقييم التعرض ل PTZ ، بما في ذلك تقييمات الأدوية المضادة للصرع ودراسات النمط الظاهري للفئران المعدلة وراثيا. إعطاء جميع نفس عدد حقن PTZ ؛ يوصى بإجمالي 8 إلى 12 حقنة. إذا مات ، فيجب الإشارة إلى درجة النوبة على أنها 6.
   3. تحديد جرعة الحقن اللازمة للحفاظ على درجة نوبة عالية (4 أو 5) ل 10 حقن أو أكثر لدراسة التغيرات النسيجية المرضية التي تحدث نوبات الصرع. في هذه الحالة ، يجب أن يتراوح إجمالي عدد الحقن من 25 إلى 30. تقليل جرعة الحقن إذا وصلت درجة النوبة إلى 5. إذا انخفضت درجة النوبة إلى 3 أو أقل، فقم بزيادة جرعة الحقن.

النتائج

الشكل 1: وصف موجز للبروتوكول. ( أ) رسم تخطيطي لإشعال النار بوساطة PTZ. ( ب) رسوم توضيحية لسلوكيات التمثيلية لدرجات النوبات المعنية.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
Pentylenetetrazole	سيجما ألدريتش	P6500
كلوريد الصوديوم	ماناك	7647-14-5
الماوس	CLEA اليابان		C57Bl / 6NJcl ، بعد الولادة 8 أسابيع ، ذكر
حقنة (1 مل)	تيرومو	SS-01T
إبرة (27 جم × 3/4 بوصة) (0.40 × 19 مم)	تيرومو	NN-2719S
ميزان الوزن	Mettler	PE2000	هذا العنصر هو منتج متوقف. يعادل تقريبا FX-2000i مع FXi-12-JA من شركة A & D.