إنشاء نموذج فأر نزيف تحت العنكبوتية الناجم عن حقن الدم الذاتي

الملخص

المصدر: Bömers, J. et al. {{}} حقنة واحدة قبل chiasmatic للدم الذاتي للحث على نزيف تحت العنكبوتية التجريبي في نموذج الفئران. J. Vis. Exp. (2021)

يوضح هذا الفيديو إجراء إنشاء نموذج فئران نزيف تحت العنكبوتية. يتم زرع فأر مخدر بمجسات لقياس الضغط داخل الجمجمة وتدفق الدم الدماغي. يتم تحديد الموقع المستهدف ، ويتم إدخال الإبرة في وضع ما قبل التصاميم. ثم يتم حقن الدم الذاتي في الفضاء تحت العنكبوتية ، مما يزيد من الضغط داخل الجمجمة ويقلل من تدفق الدم الدماغي ، مما يؤسس النموذج.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

< p class = "jove_title" >1. الاستعدادات

1. تعديل قسطرة الوريد المحيطي 16 جم للتنبيب. للتعديل ، قم بتقصير الإبرة بمقدار 1 سم وثني الجزء البعيد المتبقي 1 سم × 30 درجة باتجاه صمام الحقن. قم بإزالة أجنحة القسطرة (متعددة الاستخدامات).
2. لعمل ضغط داخل الجمجمة أو مسبار ICP ، قم بقطع قطعة 20 مم من أنابيب البوليثين (القطر الداخلي (ID): 0.58 مم ، القطر الخارجي (OD): 0.96 مم) وحرق أحد طرفيها لعمل صفيحة دائرية ، مع الحفاظ على تجويف مفتوح. التحايل على أنابيب البوليثين ب 1 مم من أنابيب السيليكون (المعرف: 1.0 مم ، OD: 3.0 مم) قبل توصيل 10 مم من أنابيب السيليكون (المعرف: 0.76 مم ، OD: 2.4 مم) بنهاية أنبوب البوليثين.
3. قم بتشغيل الكمبيوتر المحمول وافتح برنامج الحصول على البيانات. معايرة محولات ضغط الدم (BP) والضغط داخل المخ (ICP) والليزر دوبلر وفقا لتعليمات الشركة المصنعة.
4. تحضير جهاز محلل غازات الدم.
   أنذر: تأكد من وجود ما يكفي من الأيزوفلوران في المرذاذ.
5. قم بتشغيل O₂ وتدفق الهواء الجوي. اضبط تدفق O₂ على 30٪ والهواء الجوي على 70٪.
6. ضع وسادة التسخين واضبط درجة الحرارة على 37 درجة مئوية.

< ص الفئة = "jove_title" >2. التخدير

1. ضع الجرذ في حجرة التخدير بتدفق 30٪ من O₂ و 70٪ من الهواء الجوي. قم بإدارة 5٪ من غاز الأيزوفلوران في الغرفة. سيستغرق التخدير الكافي حوالي 4 دقائق. تحكم في التنفس بعناية.
2. عند التخدير ، ضع الجرذ في وضع ضعيف على صفيحة ثقيلة تحايل عليها شريط مطاطي. ضع الأسنان الأمامية للفأر أسفل الشريط المطاطي.
3. اسحب اللسان للخارج بعناية باستخدام ملقط منحني. نظف الحنجرة برأس قطني. ضع ضوءا خارجيا في خط الوسط من الحلق لتصور الحبال الصوتية.
4. التنبيب أثناء الشهيق باستخدام قسطرة الوريد المحيطي المعدلة 16 جم. عند إدخاله بشكل صحيح ، قم بإزالة الخناجر. قم بتوصيل القسطرة بجهاز التنفس الصناعي.
   ملاحظه: يتم تأكيد الوضع الصحيح للأنبوب من خلال حركات الصدر بالتزامن مع معدل التنفس. إذا شوهدت حركات البطن ، فقم بإخراج الأنبوب وإعادة إدخال الفئران في جرس التخدير. لا تكرر الإجراء أكثر من ثلاث مرات بسبب خطر إتلاف الشعب الهوائية.
5. عند التنبيب ، حافظ على في التنفس الاصطناعي مع 30٪ من O₂ و 70٪ من الهواء الجوي. حافظ على التخدير عند 1.5٪ -3٪ من الأيزوفلوران. اضبط الأيزوفلوران للحفاظ على ضغط الدم بين 80-100 مم زئبق.
6. حافظ على حجم الشهيق لجهاز التنفس الصناعي عند 3 مل والتردد عند 40-45 إلهام / دقيقة. اضبط حجم الشهيق وفقا لتحليل غازات الدم.
7. قم بعمل غرزة من خلال الأنسجة الرخوة الداخلية للخد بخياطة 2-0. اربط الخيط حول أنبوب الحقن وصمام حقن قسطرة الوريد المحيطي لربط القسطرة.
8. انقل الجرذ إلى مجال العمليات وضعه في وضع ضعيف مع توجيه الذيل نحو الجراح.
9. ضعي جل العين عند الحاجة لمواجهة جفاف العين.
10. قم بإجراء قرصة إصبع القدم للتأكد من عمق التخدير الكافي. تقييم عمق التخدير والحفاظ عليه أثناء الجراحة.

< p class = "jove_title" >3. قسطرة الذيل

1. تطهير القريب 3-4 سم من الذيل بنسبة 0.5٪ من إيثانول الكلورهيكسيدين.
   ملاحظه: من الآن فصاعدا ، استخدم المجهر الجراحي وفقا لتقدير الجراح.
2. قم بعمل شق جلدي بطول 15-20 مم في الطرف القريب من الذيل على الجانب البطني. احرص على عدم شق الشريان.
3. قم بفك الجلد من النسيج الضام الأساسي باستخدام ملقط منحني.
4. اخترق اللفافة بعناية ، مما يعرض الشريان.
5. حرر الشريان الذيل بعناية من الأنسجة الأساسية باستخدام ملقط منحني.
6. ضع ثلاثة خيوط حريرية سوداء أسفل الوعاء. ضع خيطا واحدا بعيدا قدر الإمكان واربط عقدة جراحية بإحكام حول الشريان. امسك الأطراف الفضفاضة للخيط باستخدام مرقئ.
7. اربط الخيطين المتبقيين بشكل فضفاض حول الشريان.
8. ادفع الخيط القريب بالقرب قدر الإمكان. ضع مرقئا لتثبيت نهايات الخيط القريب. اسحب الإرقاء برفق ، ولكن يكفي لتقييد تدفق الدم ومنعه. ضع الإرقاء على البطن.
9. قطع طرف القسطرة بزاوية 45 درجة. قطع النقطة الحادة لمنع اختراق جدار الشرايين.
10. باستخدام مقص Vannas ، قم بعمل شق شريان 1/3 من قطر الشريان بزاوية 30 درجة ، 3-5 مم من العقدة البعيدة.
11. أدخل القسطرة في الشريان باستخدام ملقطين مستقيمين. استخدم ملقطا واحدا لتثبيت القسطرة والآخر لسحب الشريان بعناية فوق القسطرة.
12. أدخل القسطرة أعلى الوعاء إلى العقدة القريبة وفك العقدة من المرقئ. تصور تدفق الدم في القسطرة. اربط الخيط الأوسط بشكل غير محكم بالقسطرة.
13. استمر في الإدخال إلى النقطة التي يتم فيها تغطية الشريان مرة أخرى باللفافة إن أمكن.
14. التحكم في وضع القسطرة والتسرب المحتمل عن طريق التنظيف بالمحلول الملحي.
15. اربط الخيوط القريبة باستخدام عقدة جراحية.
    ملاحظه: يجب أن يكون قياس ضغط الدم نابضا. إذا لم يكن الأمر كذلك ، فهذا يعني أن القسطرة لا توضع بشكل صحيح.
16. اربط القسطرة في نهاية الشق عن طريق ربط عقدة جراحية باستخدام الخيط البعيد.
17. قم بغرزة شق الجلد بشكل غير محكم مع خياطتين أحاديتين غير قابلتين للامتصاص 4-0. احرص على عدم اختراق القسطرة.
    ملاحظه: طوال الجراحة ، كن على دراية بسعة النبض. إذا كان هذا منخفضا ، فقم بغسل القسطرة بالمحلول الملحي.
18. قم بفك القسطرة الشريانية من محول الضغط للسماح بتدفق الدم لأخذ عينات من غازات الدم. ضع أنبوبا شعريا دقيقا في نهاية القسطرة. دع الدم يتدفق إلى الأنبوب. أعد توصيل القسطرة بالمحول بعد جمع الدم واغسل القسطرة.
19. أدخل الأنبوب الشعري في محلل غازات الدم. قم بقياس الأس الهيدروجيني و pCO₂ و pO₂ وتدوينها
    ملاحظة: اعتمادا على قيم غازات الدم وضغط الدم ، قم بتغيير معدل التهوية. إذا كان متوسط الضغط الشرياني (MAP) منخفضا جدا ، فحاول خفض معدل تدفق الأيزوفلوران. اختبر ردود الفعل لضمان عمق التخدير المناسب.

فئة < p = "jove_title" >4. مسبار برنامج المقارنات الدولية

1. ضع الجرذ في الإطار التجسيمي. من المهم وضع الفئران بشكل متماثل.
2. ضع وسادة أسطوانية تحت الإطار التجسيمي لإنشاء ثني أمامي للرقبة.
3. احلق فروة رأس الجرذ ورقبته والمنطقة خلف الأذنين. إزالة الشعر الزائد.
4. تطهير المنطقة بنسبة 0.5٪ من إيثانول الكلورهيكسيدين.
5. تخدير محليا ب 0.7 مل من 10 ملغ/5 ميكروغرام/مل ليدوكائين مع الأدرينالين، أدخل الإبرة في الطرف الذيلي للجمجمة في خط الوسط. حقن في عضلات الرقبة مع 0.3-0.4 مل. حقن الباقي تحت الجلد حول وأمام البريجما.
6. قم بعمل شق جلدي من ثقب الإبرة ~ 8 مم ذيلية في خط الوسط.
7. قم بتشريح جميع العضلات بصراحة في طبقات لتحديد الغشاء القذالي (مثلث رخامي اللون ذيلي للجمجمة في خط الوسط).
8. استخدم ضام Alm لكبح عضلات الرقبة. ضع الضام ذيلي إذا لزم الأمر.
9. تحقق مما إذا كان مسبار ICP المعقم متصلا بمحول الطاقة ICP. اغسل مسبار برنامج المقارنات الدولية بالمحلول الملحي. تأكد من عدم وجود فقاعات هواء في مسبار ICP.
10. شق الغشاء القذالي باستخدام إبرة 23 جرام. قم بعمل ثقب لإقناع مسبار برنامج المقارنات الدولية من خلال الغشاء.
قم
11. بإقناع المسبار من خلال الغشاء القذالي بلطف. اسحب المسبار برفق وتأكد من أنه يظهر منحنى نابض يتراوح بين 0-5 مم زئبق. إذا لم يكن الأمر كذلك ، فقم بإزالة المسبار ، وتحقق من الاتصال بمحول الطاقة ، وتأكد من التدفق عبر التجويف.
12. ضع قطرتين من غراء الأنسجة. حرك أنبوب السيليكون 1 مم إلى الأمام إلى الغشاء وقم بتطبيق غراء إضافي لتقليل مخاطر إزاحة مسبار ICP.
13. قم بإزالة الضام (الضامرات).
14. اصنع خياطة مرتبة أفقية واحدة في الطرف الرأسي للشق وخياطة واحدة متقطعة بسيطة إلى الطرف الذيلي باستخدام خياطة أحادية غير قابلة للامتصاص 4-0.

فئة

5. وضع الإبرة ومسبار ليزر دوبلر

1. قم بعمل شق في خط الوسط الأمامي للعينين مباشرة ، 15 مم ذيلية.
2. قم بإزالة النسيج الضام والعضلات بالملقط. استخدم نهاية قطعة قطن معقمة كروجين مما يجعل من الممكن التعرف على البريجما والخيوط الإكليلية.
3. ضع ضام Alm.
4. ضع إبرة شوكية 25 جم في الإطار التجسيمي. ضع الإبرة بالضبط على بريجما ولاحظ الموضع.
   ملاحظه: ضع مفصل خط الوسط للإطار التجسيمي عند 30 درجة باتجاه في المستوى الرأسي.
5. قم بإزالة الإبرة من البرجما ، وحرك الإطار 65 مم للأمام ، ثم استبدل الإبرة في خط الوسط لتحديد موقع الحفر.
6. حفر حتى يتم تحديد الأم الجافية أسفل العظم. قم بإزالة شظايا العظام برفق باستخدام ملقط مستقيم واملأ التجويف بشمع العظام.
7. حفر ثقب آخر 3-4 مم جانبيا على يمين بريجما وأمام الخيط الإكليلي مباشرة لدوبلر الليزر. ليس من الضروري الحفر على طول الطريق من خلال العظام. احرص على عدم اختراق الأم الجافية.
8. ابحث عن الأوعية التي يمكن أن يقيس فيها دوبلر الليزر تدفق الدم. ضع دوبلر الليزر وتحقق من القيم. مطلوب قيمة لا تقل عن 100 وحدة فو. قم بإزالة المجهر (الضوء الاصطناعي).
9. إذا كانت القيم لا تزال مقبولة ، أضف قطرة واحدة من الغراء لإصلاح المسبار.
10. أعد التحقق للتأكد مما إذا كانت القيمة أعلى من 80 فو. إذا كانت القيمة أقل من 80 FU ، فقم بإزالة المسبار وإعادة وضعه للوصول إلى قيمة أعلى من 80 FU.
    ملاحظة: القيمة ، FU ، هي وحدة تعسفية توضح تدفق الدم الدماغي (CBF).

< ص الفئة = "jove_title" >6. تحريض النزيف تحت العنكبوتية (SAH)

1. أدخل الإبرة برفق من خلال الجمجمة في خط الوسط بين نصفي الكرة الأرضية حتى تشعر بمقاومة قاعدة الجمجمة. اسحب الإبرة بمقدار 1 مم لضمان الوضع الصحيح في الأمام فقط للتصاب البصري.
2. أدر الإبرة بزاوية 90 درجة في اتجاه عقارب الساعة بحيث يشير طرف الإبرة إلى اليمين لضمان النتيجة الأكثر تجانسا عند حقن الدم. قم بإزالة الكعب الخنجر (الشكل 1).
3. التوازن لمدة 15 دقيقة وضبط مستوى التخدير للحصول على متوسط ضغط الدم الشرياني في حدود 80-100 مم زئبق.
4. إجراء تحليل غازات الدم. اضبط مستوى التخدير وفقا لذلك.
5. اسحب 500 ميكرولتر من الدم من قسطرة الذيل باستخدام حقنة سعة 1 مل بإبرة حادة 23 جم.
6. املأ المساحة الميتة لغرفة الإبرة الشوكية بالدم لتجنب حقن الهواء. قم بإزالة الإبرة 23 جم من المحقنة المملوءة بالدم وتأكد من أن المحقنة تحتوي على 300 ميكرولتر من الدم.
7. قم بتوصيل المحقنة بالإبرة الشوكية. أمسك الدم بقوة وحقن الدم يدويا لتجاوز MAP.
8. لاحظ ارتفاعا حادا في برنامج المقارنات الدولية وانخفاضا حادا في CBF على الكمبيوتر المحمول.
   ملاحظه: يجب أن يكون CBF 50٪ أو أقل مقارنة بدرجة خط الأساس لمدة 5 دقائق على الأقل حتى تنجح الجراحة ، انظر الشكل 2. لا تخضع الفئران الوهمية للخطوات 6.1-6.7 ، وبالتالي تحذف إدخال الإبرة الشوكية في المخ ، مما يقلل من النزيف التلقائي المحتمل ، وتلف الدماغ علاجي المنشأ.

النتائج

الشكل 1: نظرة عامة على الإعداد قبل تحريض SAH. من أعلى الصورة ، لاحظ أن 1) إبرة الحقن ، 2) مسبار دوبلر بالليزر ، و 3) مسبار ICP كلها في مكانها.

الشكل 2: تتبع العينة بعد الحقن داخل القراب. يوضح الرسم البياني الأحمر ضغط الدم بالملم زئبق. يوضح الرسم البيا...

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات 16 غ قسطرة الوريد المحيطي بي دي فينفلون 393229 إبرة مختصرة ، بعيدة 1 سم منحنية. تمت إزالة الأجنحة جرس التخدير / الغرفة مجهول محلل غازات الدم مقياس الإشعاع ABL80 جهاز قياس ضغط الدم (BP) الأدوات الإعلانية ML117 يتصل ب Powerlab ملقط منحني ، 12 سم × 3 ف.س.ت 11001-12 للتخدير وسادة أسطوانية, 28 سم × 4 سم محلي الصنع مصنوع من المناشف الجراحية أجهزة الحصول على البيانات الأدوات الإعلانية ML870 Powerlab برنامج الحصول على البيانات الأدوات الإعلانية LabChart 6.0 نقب كمد 1189 تحكم الحفر سيلفرادنت 300 بوصة ضوء مرن شوت KL200 وسادة التدفئة مينكو 1135 [م] إبرة تحت الجلد ، 20 جم دينار كويتي الطبي 301300 يتصل بالإطار التجسيمي جهاز مراقبة برنامج المقارنات الدولية الأدوات الإعلانية ML117 يتصل ب Powerlab مبخر الأيزوفلوران أوهميدا TEC3 لابتوب لينوفو تي 410 جهاز مراقبة دوبلر بالليزر الأدوات الإعلانية ML191 مسبار دوبلر بالليزر أكسفورد أوبترونيكس MSF100XP يتصل بشاشة دوبلر بالليزر حامل إبرة, 13 سم ف.س.ت 12001-13 للتخدير حقنة دقيقة ، 0.025 مل هاملتون 547407 إطار تجسيمي أدوات كوبف M900 المجهر الجراحي كارل زايس F170 إبرة خياطة ألجاير 1245 للتخدير تحكم درجة الحرارة CWE، INC. TC-1000 محول الطاقة × 2 الأدوات الإعلانية MLT0699 يتصل بشاشة BP و ICP جهاز التنفس الصناعي أوغو باسيل 7025 د.م المقص البيطري أسكولاب جي تي 421 ضام بلير 3 محاور، 13.5 سم أنثوس 17022-13 ضام بلانت الم ف.س.ت 17008-07 ملقط منحني، 12 سم × 2 ف.س.ت 11001-12 حامل إبرة, 13 سم ف.س.ت 12001-13 ملقط دومون مستقيم, 11 سم ف.س.ت 11252-00 رقيق البعوض المستقيم × 2 ف.س.ت 13008-12 مقص قزحية مستقيمة, 9 سم ف.س.ت 14090-09 مقص Vannas مستقيم, 10.5 سم ف.س.ت 15018-10 مسحات قابلة للامتصاص كيتنباخ 31603 خيط حرير أسود ، 4-0 ، 5 × 15 سم فوميل 14757 شمع العظام أسكولاب 1029754 جل كربومير للعين 2 مجم / جم بارانوفا مسحة قطن هاينز هيرنز وا-1 قضيب قطني مائل × 4 سليفة 120788 إبرة تحت الجلد ، 23 جم × 2 دينار كويتي الطبي 900284 يتصل بمحبس. إزالة الطرف البعيد إبرة تحت الجلد، 23 جم × 3 دينار كويتي الطبي 900284 قم بإزالة الطرف البعيد. 2 يتصل بمحبس التثبيت ، 1 بالمحقنة مسبار برنامج المقارنات الدولية: محلي الصنع مصنوعة مما يلي: أنابيب البوليثين ، 20 مم سميث الطبية 800/100/200 القطر الداخلي (ID): 0.58 مم ، القطر الخارجي (OD): 0.96 مم. أنابيب سيليكون ، 10 مم صياد 15202710 معرف: 0.76 مم ، OD: 2.4 مم. أنابيب سيليكون ، 2 مم صياد 11716513 معرف: 1.0 مم ، OD: 3.0 مم. أنابيب الهيماتوكريت الدقيقة وسم 7493 11 منشفة اختيارية, 45 سم × 75 سم مولنليك 800430 محول PinPort ، 22 جيجا إنستيك PNP3F22 حاقن PinPort إنستيك PNP3M أنابيب البوليثين ، 2 × 20 سم سميث الطبية 800/100/200 يتصل بحقنة. معرف: 0.58 مم ، OD: 0.96 مم. شريط مطاطي مجهول مشرط، 10 شفرات كياتو هاتف: 23110 Spinalneedle ، 25 جم × 3.5 بوصة براون هاتف: 5405905-01 نظام محبس ، ديسكوفيكس × 2 براون 16494 ج يتصل بمحول الطاقة خياطة ، 4-0 ، أحادية ، غير قابلة للامتصاص × 3 إيثيكون EH7145H حقنة، 1 مل BD Plastipak 1710023 حقنة ، قفل لور ، 10 مل × 4 BD Plastipak 305959 يتصل بمحول الطاقة غراء لاصق الأنسجة 3 م 1469 ساب 0.5٪ روح الكلورهيكسيدين فابورغ فارما 210918 كاربروفين 50 مجم / مل امسح البيطر 43715 مخفف 1:10 إيزوفلوران باكستر محلول ملحي متساوي التوتر أمغروس 16404 [م] ليدوكائين - أدرينالين 10 مجم / 5 ميكروغرام / مل أمغروس 16318