تحفيز الخلايا العصبية الحسية العقدية الجذرية الظهرية باستخدام ناهض مستقبلات الببتيد العصبي

الملخص

المصدر: Lin، Y.، et al. ، عزل العقد الجذرية الظهرية والثقافة الأولية لدراسة إطلاق الناقل العصبي. J. Vis. Exp. (2018)

يوضح هذا الفيديو استخدام الخلايا العقدية الجذرية الظهرية المنقولة لدراسة إطلاق الناقل العصبي عن طريق تحفيزها باستخدام ناهض مستقبلات الببتيد العصبي.

البروتوكول

< p class = "jove_title" >1. إطلاق الناقلات العصبية من خلايا DRG الأولية

1. في اليوم 6 ، بعد طلاء الخلايا (72 ساعة بعد تعداء siRNA) ، قم بتغيير وسط الثقافة إلى 200 ميكرولتر وسط خال من المصل واحتضان الخلايا في حاضنة ثاني أكسيد الكربون₃₇ درجة مئوية لمدة 30 دقيقة.
2. أضف 1 ميكرولتر من مادة كيميائية محفزة واخلط الوسائط برفق عن طريق سحب العينات. احتضان الطبق في حاضنة_CO2 37 درجة مئوية للوقت المحدد.
   ملاحظه: في هذه المقالة ، تم تحفيز الخلايا المستنبتة باستخدام ناهض NPFFR2 ، dNPA (D.Asn-Pro- (N-Me) Ala-Phe-Leu-Phe-Gln-Pro-Gln-Arg- Phe-NH2 ، 5 نانومول) ، لمدة 1 ساعة.
3. اجمع وسط الاستزراع من طبق الاستزراع وجهاز الطرد المركزي عند 5,000 × جم لمدة 5 دقائق عند 4 درجات مئوية لإزالة أي شوائب معلقة.
4. اجمع المادة الطافية من الطرد المركزي وقم بتخفيف العينات بمحلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS) حسب الحاجة. بعد ذلك ، استخدم مجموعات المقايسة المناعية للإنزيم (EIA) لفحص مستويات الناقلات العصبية.
   ملاحظه: هنا ، تم تخفيف المواد الطافية 1: 100 قبل تحليل مستوى CGRP. لم يتم تخفيف المادة الطافية قبل تحليل مستوى SP.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
DMEM-F12	Invitrogen	12400024	وسيط الثقافة
محلول الملح المتوازن لهانك	Invitrogen	14170-112	وسيط الثقافة
ماصة باستور	هيلجنبرغ	3150102	خلية الخلية
dNPA	التوليف الجينيم	غير متوفر	ناهض NPFFR2