اختبار الدرج لتقييم الوظيفة الحركية في فأر نصف باركنسون

الملخص

المصدر: Rattka، M، et al.، نهج جديد لتقييم النتائج الحركية لتأثيرات التحفيز العميق للدماغ في الفئران نصف الباركنسونية: اختبار الدرج والأسطوانة. J. Vis. Exp. (2016).

يوضح هذا الفيديو اختبار الدرج لتقييم الوظيفة الحركية في فأر نصف باركنسون مصاب بآفة في الدماغ الأيمن. تعطل الآفة إشارات الدوبامين ، مما يضعف التحكم في المخلب الأيسر ، مما يؤدي إلى بقاء المزيد من الكريات على الدرج الأيسر ، مما يشير إلى خلل وظيفي في الحركة.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل اللجنة المؤسسية المحلية لرعاية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

1. اختبار الدرج (الشكل 1)

1. مرحلة الاستحواذ
   1. قبل يوم واحد من التدريب ، تعرف على الكريات المستخدمة في اختبار الدرج.
      1. اختياري: لزيادة دافع ، استخدم تقييدا غذائيا (10-15 جم من طعام المختبر القياسي للحفاظ على وزن الجسم عند 90٪ من مستوى التغذية المجانية). ومع ذلك ، هذا ليس إلزاميا لتحقيق تأثير تدريبي إيجابي. أجريت هذه الدراسة دون قيود على الغذاء.
   2. قم بإعداد صندوق درج زجاجي بلاستيكي شفاف (ارتفاع: 34.5 سم ، الطول: 35.5 سم ، العرض: 12 سم ، والحجرة الضيقة 6 سم) عن طريق تنظيف الصندوق بمحلول حمض الأسيتيك 0.1٪. ملاحظة: صندوق الدرج عبارة عن صندوق من جزأين مع منصة مرتفعة ودرجين في المقصورة الضيقة. لا يمكن الوصول إلى الخطوات اليسرى على الدرج في المقصورة الضيقة إلا بالمخلب الأيسر ، والخطوات اليمنى فقط بالمخلب الأيمن.
      ملاحظة: تتكون صناديق السلالم القياسية من مقصورتين بغطاء. إذا كان سيتم استخدامها في التجارب مع الفئران المحفزة عبر الكابل ، فاستخدم صندوقا مرتفعا بدون غطاء.
   3. قم بإزالة الدرج واملأ الآبار في كل خطوة بثمانية حبيبات 45 مجم.
   4. أدخل الدرج وضع ثماني كريات إضافية على المنصة المرتفعة.
   5. ضع الجرذ في صندوق النقل.
   6. انقل الجرذ من قفص المنزل إلى صندوق الدرج باستخدام صندوق النقل.
   7. ضع الجرذ في صندوق الدرج ( الشكل 2 ).
   8. بعد خمس دقائق ، أخرج من صندوق الدرج وأعده إلى قفص المنزل باستخدام صندوق النقل.
   9. لاحظ عدد الكريات التي تم تناولها من المنصة و (في النهاية) من السلالم اليمنى واليسرى.
   10. أعد ملء الدرج عن طريق ملء الآبار في كل خطوة بثمانية حبيبات 45 مجم.
   11. قم بتنظيف صندوق الدرج بمحلول حمض الأسيتيك بنسبة 0.1٪ وضع الكريات الإضافية على المنصة.
   12. كرر هذا الإجراء (مرحلة الاستحواذ) ثلاثة أيام متتالية.
       ملاحظة: تم إجراء جميع التجارب الموصوفة على ذكور فئران Sprague Dawley. يمكن أن تختلف مدة وحدات التدريب المختلفة في الفئران من سلالات وأجناس وبائعين مختلفين.
2. اختبار الاختيار الحر
   1. نظف صندوق الدرج بمحلول حمض الأسيتيك بنسبة 0.1٪.
   2. قم بإزالة الدرج واملأ الآبار في كل خطوة بثمانية حبيبات 45 مجم.
   3. ضع الجرذ في صندوق النقل.
   4. انقل الجرذ من قفص المنزل إلى صندوق الدرج باستخدام صندوق النقل.
   5. ضع الجرذ في صندوق الدرج.
   6. بعد خمس دقائق ، أخرج من صندوق الدرج وأعده إلى قفص المنزل باستخدام صندوق النقل.
      لاحظ عدد الكريات التي تم تناولها من الدرج الأيمن والأيسر.
   7. ملاحظة: إذا كانت لا تزال تواجه مشاكل في الإمساك بالكريات ، فأضف المزيد على المنصة حيث يمكن الوصول إليها بسهولة.
   8. أعد ملء الدرج عن طريق ملء الآبار في كل خطوة بثمانية حبيبات 45 مجم.
   9. نظف صندوق الدرج بمحلول حمض الأسيتيك بنسبة 0.1٪ للحيوان التالي.
   10. كرر هذا الإجراء (مرحلة الاختيار الحر) ثلاثة أيام متتالية.
       ملاحظة: تم الحصول على النتائج المعروضة من خلال التدريب الذي تم إجراؤه دون فترة راحة بين الوحدات. تفضل بعض المجموعات يوم راحة للتوحيد لدعم عملية التدريب.
3. اختبار الاختيار القسري
   1. نظف صندوق الدرج بمحلول حمض الأسيتيك بنسبة 0.1٪.
   2. قم بإزالة الدرج واملأ الآبار في كل خطوة على الدرج الأيسر بثمانية (الأيام الثلاثة الأولى من الوحدة) أو أربعة (ثلاثة أيام متتالية من الوحدة) 45 مجغ كريات.
      1. قم بإجراء اختبار الاختيار القسري على الجانب ، حيث سيحدث الضرائب.
         ملاحظة: نقوم بإجراء آفة باركنسون في نصف الكرة الأيمن وبالتالي ندرب بشكل انتقائي المخلب الأيسر.
   3. ضع الجرذ في صندوق النقل.
   4. انقل الجرذ من قفص المنزل إلى صندوق الدرج باستخدام صندوق النقل.
   5. ضع الجرذ في صندوق الدرج.
   6. بعد خمس دقائق ، أخرج من صندوق الدرج وأعده إلى قفص المنزل باستخدام صندوق النقل.
   7. لاحظ عدد الكريات التي تم تناولها من الدرج الأيسر.
   8. أعد ملء الدرج عن طريق ملء الآبار في كل خطوة بثمانية أو أربعة حبيبات 45 مجم (يعتمد عدد الكريات على يوم التدريب).
   9. نظف صندوق الدرج بمحلول حمض الأسيتيك بنسبة 0.1٪ للحيوان التالي.
   10. كرر هذا الإجراء (مرحلة الاختيار القسري) ستة أيام متتالية.
4. الحصول على البيانات
   1. قم بإجراء التجربة كما هو موضح لوحدة الاختيار القسري (أربع كريات في كل بئر على الدرج الأيسر) في يومين متتاليين. احسب معدل النجاح (عدد الكريات التي تم تناولها) كمتوسط لليومين.

النتائج

الشكل 1: إعداد اختبار الدرج. صندوق الدرج مرتبة مع الكريات على الدرج الأيسر. (أ) منظر جانبي ، (ب) منظر من الأعلى.

الشكل 2: اختبار الدرج. فأر نصف باركنسون أثناء اختبار الدرج.

(ملاحظة: اقتصاص النص الشكل 5 من الصورة)

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
صندوق الدرج مع غطاء	Glas Keil، ألمانيا		صنع حسب الطلب
كريات دقيقة خالية من الغبار ، 45 مجم	الخدمة الذاتية	F0021