تقييم الضعف الحركي في نماذج C. ايليجانس باستخدام مقايسة الحركة الشعاعية

الملخص

المصدر: Currey، H. N.، et al. تقييم الضعف الحركي في C. ايليجانس نماذج التصلب الجانبي الضموري. J. Vis. إكسب. (2021).

يوضح هذا الفيديو استخدام مقايسة الحركة الشعاعية لتقييم الخلل الحركي في C. ايليجانس يعبر عن بروتين TDP-43 البشري من النوع البري أو ALS. يسمح للديدان ذات المستويات المتفاوتة من التعبير TDP-43 من النوع البري أو المتحور بالزحف ، ويتم قياس حركتها بالمسافة الشعاعية المقطوعة من النقطة المركزية على لوحة الفحص. يميز الاختبار بين الإعاقات الحركية الخفيفة والمتوسطة والشديدة بناء على المسافة التي تقطعها سلالات C. ايليجانس.

البروتوكول

1. فحص الحركة الشعاعية

1. قم بإعداد أطباق بتري بقطر 100 مم أو 150 مم ، نصفها تقريبا مليء بوسط نمو الديدان الخيطية (NGM) ومصنفة بحديقة موحدة من بكتيريا OP50 لتغطية سطح الأجار بالكامل.
2. اقلب لوحات فحص NGM رأسا على عقب وقم بتسمية الجزء السفلي بمعرف ل C. ايليجانس السلالات المراد فحصها ، لوحين لكل سلالة (الشكل 1 أ).
3. اصنع نقطة صغيرة مع العلامة في وسط اللوحة المقلوبة (الشكل 1 أ).
4. أثناء العمل باستخدام مجهر تشريح ، انقل 15-20 ديدانا متطابقة إلى مركز لوحة الفحص مباشرة فوق النقطة المركزية (مرئية من خلال NGM) باستخدام اختيار سلك بلاتيني (الشكل 1 ب).
   

النتائج

الشكل 1: سير عمل فحص الحركة الشعاعية. تظهر اللوحات A-E الخطوات المعممة لمقايسة الحركة الشعاعية. الخطوات هي كما يلي: (A ) يتم تحضير لوحات NGM ، مع OP50 المصنف على الحواف ، عن طريق وضع العلامات على النقطة المركزية وتمييزها ، (B ) يتم وضع الديدان في وسط الأجار كما هو موضح بالنقطة المركزية ، (C ) يسمح للديدان بالتحرك بحرية لفترة زمنية م.......

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
C. elegans	مركز علم الوراثة Caenorhabditis (CGC)	-	احصل على سلالات القراءة حسب الرغبة ، N2 هي سلالة تحكم مفيدة
ماصات باستور يمكن التخلص منها ، زجاج البورسليكات	VWR	14673-010	تستخدم الماصة الزجاجية لإنشاء معول دودي - أمسك ماصة زجاجية بيد واحدة و ~ 1 بوصة من الأسلاك البلاتينية (مثبتة بواسطة كماشة) في الأخرى فوق اللهب للانضمام.
أطباق بتري يمكن التخلص منها، 35 × 10 مم	VWR	10799-192	لوحات الفحص لنظام التصوير WormLab
أطباق بتري يمكن التخلص منها، 60 × 15 مم	VWR	25384-090	لوحات مخزون للديدان
أطباق بتري يمكن التخلص منها، 100 × 15 مم	VWR	25384-302	لوحة فحص الحركة الشعاعية القياسية
أطباق بتري يمكن التخلص منها، 150 × 15 مم	VWR	25384-326	لوحة فحص الحركة الشعاعية ذات الإطار الزمني الأطول
تشريح المجهر	لايكا	M80	مجال الحفاظ على الديدان وإعداد فحوصات الحركة الشعاعية
علامات ذات رؤوس دقيقة	VWR	52877-810	تحتاج إلى 2 ألوان على الأقل لمقايسات الحركة الشعاعية. نصائح دقيقة مطلوبة للدقة.
ماسح ضوئي مسطح	أمازون	Epson Perfection V850	اختياري لمقايسة الحركة الشعاعية. يفترض البروتوكول دقة 300 نقطة في البوصة ، ومعظم الماسحات الضوئية ستعمل بشكل جيد
NGM (وسط نمو الديدان الخيطية)	VWR	76347-412	وسط يستخدم لزراعة C. ايليجانس. يمكن صنعه من الصفر ، انظر WormBook: صيانة C. elegans
بكتيريا OP50	مركز علم الوراثة لالتهاب كينورهابديت (CGC)	OP50	مصدر الغذاء الأساسي ل C. ايليجانس
P1000 ماصة	VWR	76207-552	الماصة المستخدمة في فحص السباحة
p1000 نصائح	VWR	83007-384	نصائح لجهاز ماصة ، تستخدم في فحص السباحة
سلك بلاتيني ، قطر 0.2032 مم	VWR	BT136585-5M	سلك بلاتيني دقيق يستخدم لإنشاء معول دودي - أمسك ماصة زجاجية في يد واحدة و ~ 1 بوصة من الأسلاك البلاتينية (التي تمسك بها كماشة) في الطرف الآخر فوق اللهب للانضمام.
المسطرة	VWR	56510-001	تحتاج إلى تسجيل فحوصات الحركة الشعاعية
ImageJ	المعاهد الوطنية للصحة	-	البرمجيات الحرة الاختيارية المقدمة من المعاهد الوطنية للصحة - https://imagej.nih.gov/ij/
نظام التصوير WormLab	MBF العلوم البيولوجية	WormLab	يتضمن نظام التصوير أجهزة WormLab (مجال ساطع المسرح والكاميرا والمبيت) وبرنامج WormLab. https:// www.mbfbioscience.com/wormlabimaging- النظام