إزالة التعصيب الودي للشرايين الكلوية في نموذج فأر ارتفاع ضغط الدم الناجم عن الأنجيوتنسين II

الملخص

المصدر: Wang، M.، et al., أدى تحسين إزالة التعصيب الكلوي إلى تخفيف ارتفاع ضغط الدم الناجم عن ضخ الأنجيوتنسين الثاني. J. Vis. Exp. (2022)

يوضح هذا الفيديو إجراء لإزالة التعصيب الودي للشريان الكلوي في نموذج فأر ارتفاع ضغط الدم الناجم عن الأنجيوتنسين II ، باستخدام الفينول لتعطيل وظيفة العصب الودي وخفض ضغط الدم.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل اللجنة المؤسسية المحلية لرعاية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

1. نزع التعصيب الكلوي الثنائي

1. حدد الفئران المصابة بارتفاع ضغط الدم (BP) ≥140/90 مم زئبق أو زيادة بنسبة 25٪ في ضغط الدم الانقباضي / ضغط الدم الانبساطي ، بعد أسبوع واحد من تسريب Ang II.
2. سجل وزن قبل الجراحة واختر التي لا يقل وزنها عن 24 جراما لجراحة إزالة التعصيب الكلوي.
3. تخدير الفئران باستخدام بنتوباربيتال الصوديوم. تأكد من عمق التخدير باستخدام منعكس قرصة إصبع القدم السلبي.
4. قم بإزالة الشعر على البطن باستخدام ماكينة حلاقة. قم بإجراء هذا الإجراء بعناية ودقة لتجنب أي تلوث جراحي.
5. ضع الفئران على طاولة العمليات ، مع الحفاظ على البطن لأعلى ، وإصلاح أطرافها بشريط لاصق. تطهير جلد البطن ببوفيدون اليود ، متبوعا بثلاث مناديل تحتوي على 70٪ إيثانول.
6. قم بعمل شق بطني في خط الوسط البطني بطول 2 سم باستخدام شفرة مشرط. اسحب الأمعاء للخلف بشاش مبلل بمحلول ملحي 37 درجة مئوية لكشف الشريان الكلوي الأيسر. قم بتشريح الدهون بعناية ولكن بصراحة بعيدا عن الشريان الكلوي باستخدام ملاقط منحنية. ( الشكل 1A-C ).
7. قص ورق الوزن إلى مستطيل بنفس حجم الشريان الكلوي بمقص حاد معقم. كمرجع، قم بقص ورق الوزن بنفس الحجم كما هو موضح في الخط المنقط في الشكل 1C.
   ملاحظة : يعد محاولة قص عدة قطع من ورق الوزن في وقت واحد للحفاظ على نفس الشكل جزءا مهما من الجراحة.
8. اغمس ورق الوزن في محلول فينول/إيثانول بنسبة 10٪ لمدة 30 ثانية على الأقل. قم بتغطية سطح الشريان الكلوي الأيسر ولف الوعاء بورق الوزن ، مع الاحتفاظ به لمدة دقيقتين ( الشكل 1D ). استخدم الشاش لحماية الأنسجة المحيطة لمنع ورق الوزن من ملامسة الكلى والأمعاء المحيطة.
   ملاحظة: محلول الفينول مستقر في الأنابيب البلاستيكية ولكن ليس القوارير الزجاجية. لذلك ، يجب أن يكون الحل جاهزا لكل تجربة.
9. قم بإجراء نفس الإجراء للشريان الكلوي الأيمن. إجراء الجراحة الوهمية بورق وزن مغمور في محلول ملحي.
10. أعد وضع العضلات في موضعها الأولي وأغلق الصفاق ب 6-0 خيوط فيكريل في خياطة متقطعة. ثم أغلق الجلد بخيوط نايلون 4-0 متقطعة. راقب جميع الفئران حتى تتعافى تماما.

2. رعاية ما بعد الجراحة

1. ضع بوفيدون اليود على الشق وضع في بطانية كهربائية دافئة للتعافي ومراقبة ما بعد الجراحة.
2. راقب الفئران مرتين يوميا لتقييم الاحمرار والتورم والألم أو التهاب البطن. توفير ميلوكسيتام (0.5 مجم / كجم ، SC) لجميع الفئران قبل حوالي ساعة واحدة من إجراء RDN و 24 ساعة بعده.

النتائج

الشكل 1: إجراء RDN باستخدام ورق الوزن. (أ,ب) الصور التشريحية للشريان الكلوي من الفئران C57BL / 6 ( ex vivo ). (C) يشير الجزء الموجود داخل الخطين المنقطين إلى المنطقة التي يغطيها ورق الوزن. (D) تغطية سطح الشريان الكلوي الثنائي بورق الوزن المناسب المغمور في محلول الفينول / الإيثانول بنسبة 10٪. لا تقم بتغطية ورق الترشيح خارج الخط المنقط. * يشي...

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
الأنجيوتنسين الثاني	سانغون للتكنولوجيا الحيوية	CAS: 4474-91-3	لعمل نموذج أنيمول لارتفاع ضغط الدم
تحليل ضغط الدم	أنظمة الزائرات	BP-2000	قياس ضغط دم الفئران
مضخة تناضحية صغيرة	شركة DURECT	CA 95014	لملء الأنجيوتنسين II
ورق الوزن	سانغون للتكنولوجيا الحيوية	F512112	لتدمير العصب الكلوي بورق وزن مغمور بالفينول ؛ https://www.sangon.com/productDetail?productInfo.code=F512112.