تقنية استئصال موجهة تجسيمية لإزالة القشرة السمعية في الفئران

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

ملاحظة: أجرينا التجارب على ذكور الفئران لتجنب أي تغيرات هرمونية.

1. تخدير باستخدام مزيج من هيدروكلوريد الكيتامين (30 مجم / كغ) وهيدروكلوريد زيلازين (5 مجم / كغ) عن طريق الحقن العضلي ؛ بهذه الجرعة ، يجب تخدير الجرذ بعمق لمدة 1 ساعة تقريبا.
2. اضغط على إصبع قدم الفئران ؛ يشير عدم وجود رد فعل انسحابي إلى أن فاقد للوعي تماما. إذا استجاب الجرذ للقرصة ، فقم بإعطاء تخدير تكميلي بثلث الجرعة الأولية.
3. حلق فروة الرأس وتطهير المنطقة الجراحية ببوفيدون اليود.
4. ضع على وسادة تدفئة للحفاظ على درجة حرارة 38 درجة مئوية وتثبيت رأس في إطار تجسيمي باستخدام قضيبين للأذن وقضيب لدغة. توخي الحذر لتجنب ثقب الغشاء الطبلي بقضبان الأذن.
5. احم العينين عن طريق وضع قطرة من جل العين أو محلول ملحي في الدم على كل عين.

1. باستخدام مشرط ، قم بعمل شق على طول خط الوسط لكشف الجمجمة وسحب السمحاق الذي يغطي سطح الجمجمة.
2. استخدم طرفا قطنيا معقما لإزالة أي دم يغطي سطح الجمجمة برفق لتصور بريجما ، لامدا ، وبين الأذنين 0 وفقا لأطلس Paxinos و Watson لدماغ الفئران.
3. قم بعمل شق في العضلة الصدغية بالقرب من إدخالها الظهري على الجمجمة بمشرط. اسحب العضلات للخارج باستخدام إبرة ومادة خياطة وقم بتثبيت مادة الخياطة على الإطار التجسيمي ؛ هذا سوف يكشف العظم الصدغي. في حالة حدوث نزيف ، اشطفه بمحلول ملحي معقم بارد.
4. ضع إبرة مستقيمة معقمة في المعالج الدقيق التجسيمي ، وتأكد من تأمينها بالكامل.
5. اخفض الإبرة ببطء حتى تصبح فوق سطح الجمجمة مباشرة ، بحيث يتم ضبط طرف الإبرة على 0 بين الأذنين. اضبط هذه النقطة على أنها صفر وحدد الإحداثيات من هذه النقطة.
6. اعتمادا على منطقة اهتمام الدماغ ، تختلف الإحداثيات التجسيمية. حدد هذه الإحداثيات باستخدام أطلس Paxinos و Watson لدماغ الفئران. بمجرد تحديد الإحداثيات ، حرك الإبرة لتتناسب مع تلك الإحداثيات.
7. استهدف التيار المتردد باستخدام إحداثيات النقاط الأربع التالية: أ: الأمامي الخلفي (A / P) = -5.8 مم ، المتوسط الوحشي (M / L) = +/- 6.4 مم ؛ ب: A / P = -2.7 مم ، M / L = +/- 6.4 مم ؛ ج: A / P = -2.7 مم ، M / L = +/- 8.67 مم ؛ D: A / P = -5.8 مم ، M / L = +/- 8.67 مم. اخفض الإبرة إلى أعلى العظم الصدغي مباشرة لتصور كل نقطة من هذه النقاط الأربع. باستخدام قلم تحديد ، ضع علامة على النقاط الموجودة على العظم الصدغي وربطها لرسم مستطيل ؛ سيكون المستطيل بمثابة دليل لفتح نافذة في العظم (الشكل 1).

3. التعرض الجراحي للتيار المتردد

1. افتح النافذة باستخدام مثقاب كهربائي ومثقاب صغير (0.6 مم Ø). حفر محيط المستطيل عند 8,000 دورة في الدقيقة حتى ينفجر العظم. قم بتبريد سطح الحفر عن طريق الشطف بمحلول ملحي معقم بارد لمنع تلف الهياكل تحت القشرية. عندما يفسح العظم المجال ، يمكن اكتشاف انخفاض في المقاومة. احرص على عدم حفر الدماغ.
2. عندما تكون الحدود فضفاضة ، اسحب عظم التغطية بالملقط الناعم وقم بتخزينه في محلول ملحي معقم بارد.

1. باستخدام المجهر الجراحي (10X) ، قم بقطع السحايا برفق بسكين جراحي مجهري وقم بإزالتها باستخدام ملقطين مدببين دقيقين. في حالة حدوث نزيف ، اشطفه بمحلول ملحي معقم بارد.
قم
2. بشفط مكيف الهواء برفق باستخدام جهاز شفط جراحي (ضغط -0.24 بار) مقترن بإبرة معقمة ذات طرف حاد 20 جم. هذه النقطة حاسمة ويجب إجراؤها بعناية فائقة: استنشق الطبقات القشرية الست فقط وليس المادة البيضاء الأساسية.
3. استنشق حتى تتوقف الشرايين المثقبة عن النزيف.
4. عند الانتهاء من الشفط ، قم بتغطية المنطقة المصابة بالعظم المستخرج وقم بتطبيق شاش مرقئ قابل للامتصاص.
5. دع العضلة الصدغية تستعيد موضعها الأصلي ، ثم قم بخياطة الجلد باستخدام مشابك الجرح (9 مم). ضع مرهم مضاد حيوي. استمر في وضع المرهم على الجرح مرتين يوميا لمدة ثلاثة أيام.
   ملاحظة: يتكون كل تطبيق من طبقة رقيقة توضع على الجرح.
6. حقن البوبرينورفين تحت الجلد في الجزء الخلفي من الجرذ (0.05 ملغ/كغ) كمسكن 1 ساعة بعد الجراحة, وبعد ذلك كل 8 ساعات خلال 72 ساعة.
7. احتفظ بالحيوان على وسادة التدفئة حتى يستيقظ وأعده إلى قفص السكن الخاص به للتعافي.

الشكل 1: صور للعظم الصدغي للفئران في ثلاث خطوات جراحية مختلفة. ( أ ) نقل الإحداثيات التجسيمية للتيار المتردد إلى العظم الزمني. إحداثيات النقاط الأربع هي: A: A / P = -5.8 مم ، M / L = +/- 6.4 مم ؛ ب: A / P = -2.7 مم ، M / L = +/- 6.4 مم ؛ ج: A / P = -2.7 مم ، M / L = +/- 8.67 مم ؛ D: A / P = -5.8 مم ، M / L = +/- 8.67 مم. ( B ) تستخدم الإحداثيات كمرجع لرسم مستطيل على سطح العظم الصدغي يوجه فتح النافذة. (C) يظهر النافذة المفتوحة في العظم بعد الحفر. يمكن ملاحظة السحايا مع الأوعية الدموية على سطح الدماغ. R: منجل ، D: ظهري.