تقنية للحث على نوبات ما بعد الصدمة في نموذج فأر عن طريق إصابة رضحية بانخفاض الوزن

الملخص

المصدر: Shandra، O. et al., إحداث صرع ما بعد الصدمة في نموذج فأر لإصابات الدماغ الرضحية المنتشرة المتكررة. J. Vis. Exp. (2020)

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل لجنة رعاية المؤسسية المحلية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

< p class = "jove_title" >1. إجراء إنقاص الوزن

1. ضع الماوس في غرفة الحث. اضبط تدفق الأكسجين والفراغ على 1 لتر / دقيقة ومستوى غاز الأيزوفلوران على 3٪ -5٪. قم بتخدير الماوس لمدة 5 دقائق.
2. أخرج الماوس من غرفة الحث وضعه على وسادة رغوية. اختبار عدم وجود استجابة لقرص إصبع القدم أو الذيل.
3. تطبيق مسكن (0.1 ملغ/كغ بوبرينورفين) تحت الجلد. إذا تم إجراء جراحة تخطيط كهربية الدماغ (EEG) في نفس اليوم، يتم تطبيق البوبرينورفين تحت الجلد مع كاربروفين غير الستيرويدي المضاد للالتهابات (5 ملغ/كغ).
4. يدير محلول لاكتات الصوديوم (3 ميكرولتر لكل جرام من وزن) تحت الجلد قبل أو بعد الاصطدام الأخير. يمكن خلط محلول لاكتات الصوديوم مع المسكنات للإعطاء السريع في حقنة واحدة.
   ملاحظه: يحتوي محلول لاكتات الصوديوم على خليط من كلوريد الصوديوم وكلوريد البوتاسيوم وكلوريد الكالسيوم ولاكتات الصوديوم في الماء. تساعد هذه الخطوة على استبدال السوائل والإلكتروليتات ، مما يساعد على التعافي.
5. ضع رأس الماوس أسفل أنبوب إسقاط الوزن (الشكل 1 أ) وضع قرصا مسطحا من الفولاذ المقاوم للصدأ (قطره 1.3 سم ، وسمك 1 مم ، ووزن 880 مجم) في وسط الرأس ، بين خط العينين والأذنين.
   ملاحظه: ينشر هذا القرص التأثير عبر سطح الجمجمة (الشكل 1 ب).
6. قم بإزالة الدبوس الموجود في أنبوب إسقاط الوزن لتحرير قضيب الوزن 100 جم من ارتفاع 50 سم. للحث على إصابة زائفة للفئران الضابطة ، قم بإزالة قضيب الوزن من الأنبوب لمنع الإطلاق العرضي للدبوس وانخفاض الوزن.
   ملاحظه: يجب وضع رأس بشكل مسطح ، بحيث يسقط القضيب بحرية على كامل سطح القرص.
7. ضع الفاقد للوعي على ظهره للتعافي على وسادة تدفئة مغطاة بمنشفة ماصة معقمة متعددة البطانات. يمكن قياس وقت التعافي المنعكس الصحيح (أي الوقت الذي يستغرقه الماوس لتصحيح نفسه من ظهره) كقراءة للوقت الذي يقضيه فاقدا للوعي.

النتائج

الشكل 1: نموذج الفأر لإصابات الدماغ الرضحية المنتشرة المتكررة (TBI). (أ) جهاز إنزال الوزن. (a1) أنبوب إسقاط الوزن. (a2) قضيب وزن 100 جرام. (a3) دبوس عقد قضيب. (a4) سلسلة لرفع القضيب لأعلى في حالة تغيير الارتفاع أو إزالة القضيب من أنبوب إسقاط الوزن. (a5). وسادة رغوة لوضع تحت أنبوب إسقاط الوزن. (

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
بوبرينورفين	شركة بار للمستحضرات الصيدلانية ، شركة ، سبرينج فالي ، نيويورك ، الولايات المتحدة الأمريكية	60969
C57BL/6 فئران	شركة Harlan / Envigo Laboratories Inc		ذكر ، 12-16 أسبوعا
C57BL/6 فئران	مختبر جاكسون		ذكر ، 12-16 أسبوعا
كاربروفين	Zoetis Services LLC, Parsippany, NJ, USA	26357	ملاحظة: يضاف هذا الدواء أثناء انخفاض الوزن فقط إذا تم إجراء زرع القطب الكهربائي التجسيمي في نفس اليوم
سائل فلوريسو للتخدير بالاستنشاق	شركة MWI للإمدادات البيطرية ، الولايات المتحدة الأمريكية	502017
قرص من الفولاذ المقاوم للصدأ			صنع حسب الطلب
وسادات مناشف ماصة معقمة مبطنة بولي	كاردينال هيلث ، الولايات المتحدة الأمريكية	3520