$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
تمت مراجعة جميع الإجراءات المتعلقة بالنماذج الحيوانية من قبل اللجنة المؤسسية المحلية لرعاية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.
1. تحريض ارتفاع ضغط الدم العيني
- إحداث الجلوكوما التجريبية عن طريق رفع ضغط العين (IOP) عن طريق الحقن أحادي الجانب للكريات المجهرية المغناطيسية في الغرفة الأمامية للفئران البني النرويجية. قد تكون الفئران المصطبغة الأخرى مناسبة ، على الرغم من أن المستخدم سيحتاج إلى التحقق من صحتها أولا.
- قم بتخزين 250-300 جم من أنثى المربية السابقة من فئران Brown Norway في بيئة منخفضة الإضاءة ثابتة (40-60 لوكس) لتقليل التقلبات النهارية في IOP ، مع إمكانية الوصول إلى الغذاء والماء.
- خذ قياسات IOP الأساسية في المستيقظة8 قبل التخدير وحقن الخرز، باستخدام مقياس توتر العين الارتدادي المعاير للاستخدام في عين الجرذ9. يؤخذ IOP كمتوسط لخمس قراءات.
- تخدير الفئران ب 37.5 مجم / كجم من الكيتامين و 0.25 مجم / كجم هيدروكلوريد ميديتوميدين يتم تسليمه داخل الصفاق. تأكد من عمق التخدير عن طريق اختبار ردود الفعل الخلفية للقدم الحيوانية قبل تطبيق بوفيدون اليود (انظر الخطوة 1.5) وحقن الخرز (انظر الخطوة 1.8). تطبيق 0.5٪ بروباراكائين هيدروكلوريد لعلاج التسكين.
ملاحظة: لا تقم بتوسيع التلميذ في أي مرحلة. سيساعد ذلك الخرزات على الاستقرار بشكل أفضل في زاوية القزحية القزحية ومنع الارتباط بالعدسة. ضع مرهما العيني لمنع جفاف القرنية على العين المقابلة غير الجراحة.
- غسل العين العملية ب 5٪ بوفيدون اليود في الماء قبل 5 دقائق من الحقن.
- بعد 5 دقائق ، قم بالتخلص من اليود بوفيدون باستخدام شاش معقم واغسل العين بمحلول ملحي معقم بنسبة 0.9٪. حافظ على رطوبة العين أثناء التخدير مع التطبيق المنتظم للمحلول الملحي المعقم.
- ضع مغناطيسا حلقيا حول العين.
- حقن 25 ميكرولتر من محلول يحتوي على 30 مجم / مل من الكريات المجهرية المغناطيسية المعقمة بأشعة جاما 8 ميكرومتر في محلول الملح المتوازن من هانك (HBSS) في الغرفة الأمامية باستخدام إبرة مشطوفة 33 جم.
- لتحضير الخرز، يغسل عن طريق إعادة التعليق، ثم الطرد المركزي 3 مرات عند 10,000 × جم لمدة 5 دقائق باستخدام 1 مل HBSS قبل صنع المحلول النهائي 30 ملغم/مل. حافظ على ظروف معقمة طوال الوقت.
- للحقن ، احرص على تجنب إدخال الإبرة في القزحية ، لتقليل مخاطر صدمة القزحية. يمكن منع ذلك عن طريق توجيه الإبرة عرضية إلى سطح القرنية ، بالتوازي مع القزحية قدر الإمكان. سيساعد هذا أيضا على تقليل فقدان الخرزة من موقع الحقن.
ملاحظة: حقن الخرز بمعدل سريع لضمان توزيع متساو حول زاوية القزحية القزحية ، وهو أمر بالغ الأهمية لرفع IOP. بالإضافة إلى ذلك ، قم بتخزين الخرز والإبر والحلقات المغناطيسية بشكل منفصل حتى لا تشكل الخرزات مجموعات ، مما يجعل من الصعب تحميلها في المحقنة وحقنها ، ولا تصبح الإبرة ممغنطة.
- اترك الإبرة في مكانها لمدة 1 دقيقة بعد الحقن للتأكد من أن الخرزات تستقر في زاوية القزحية القزحية لإعاقة التصريف المائي من الشبكة التربيقية. زاوية الإبرة قليلا بعد أن استقرت الخرزات في البداية للسماح ببعض تسرب المياه ، لتقليل الزيادات العابرة في IOP. في نهاية الجراحة ، اغسل الإبرة باستخدام محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS) ، ثم 70٪ إيثانول ، متبوعا بالماء المقطر ، لضمان استمرار استخدام الإبرة في إجراءات منفصلة. بدلا من ذلك ، يمكن للمرء استخدام الإبر التي تستخدم لمرة واحدة إذا كان المقياس الصحيح ومجموعة الحقنة متاحة. اختياري: يمكن شحذ الإبر باستخدام شطبة لإطالة استخدامها.
- في هذه المرحلة إذا لزم الأمر ، قم بإزالة المغناطيس واستخدامه لسحب الخرز في مناطق التغطية غير المكتملة.
- اترك المغناطيس في مكانه حول العين لمدة 10 دقائق أخرى بعد الحقن لضمان استقرار الخرزات جيدا في زاوية القزحية القزحية.
- التخدير العكسي باستخدام 0.25 مجم / كجم هيدروكلوريد أتيبيميزول.
- يتم تطبيق الكلورامفينيكول أو مرهم مضاد حيوي آخر، على سبيل المثال، جنتاميسين أو تيراميسين موضعيا للوقاية من العدوى، و0.5٪ بروباراكائين هيدروكلوريد للتسكين. اترك لتتعافى على حصيرة حرارية حتى تستعيد الحركة ، ثم انقلها إلى صندوق دافئ وزودها بتغذية إضافية ، مثل مكمل غذائي أو نظام غذائي منتظم مبلل ، حتى يكتمل الشفاء. يجب إعطاء التسكين الجهازي أو الموضعي للحيوانات التي تظهر عليها علامات الألم بعد 24 ساعة من الجراحة. إذا استمرت هذه الأعراض على الرغم من العلاج ، فيجب إعدام بشكل إنساني.
- استخدم العين المقابلة كعنصر تحكم غير خاضع.
- قم بإجراء قياسات IOP كل 2-3 أيام بعد إعطاء الخرزة وكل 2-3 أيام بعد ذلك باستخدام مقياس توتر العين الارتدادي الذي تمت معايرته للاستخدام في عين الجرذ.