نمذجة إصابات الرأس المتكررة في نموذج الفأر

الملخص

المصدر: يانغ ، ز. ، et.al. نموذج إصابة الرأس الارتجاجي المتكرر في الفئران. J. Vis. Exp. (2016).

يوضح هذا الفيديو تحريض إصابات الرأس المتكررة في الفأر باستخدام جهاز تأثير كهرومغناطيسي. يتضمن الإجراء وضع طرف الصدمات بين الغرز الأمامية واللامدوية على جمجمة فأر مخدر واستخدام طرف مسبار لضبط عمق التأثير بدقة. يتم تسليم التأثير بسرعة وعمق متحكم فيهما لمحاكاة إصابات الدماغ الرضحية الخفيفة ، تليها فترة نقاهة ، مع تكرار الإصابات على فترات محددة.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على نماذج حيوانية من قبل اللجنة المؤسسية المحلية لرعاية ومجلس المراجعة البيطرية JoVE.

1. رعاية

1. استخدم الفئران الذكور C57BL / 6J البالغة من العمر 3-4 أشهر. توفير الفراش ومواد التعشيش والطعام والماء ad libitum. حافظ على الفئران في درجات الحرارة المحيطة التي يتم التحكم فيها عند 20-22 درجة مئوية مع دورات إضاءة ثابتة لمدة 12 ساعة / 12 ساعة مظلمة.

2. تحضير ما قبل الانحشار

1. قم بتوصيل طرف معدني مطلي بمطاط السيليكون حسب الطلب بجهاز تأثير تجسيمي كهرومغناطيسي. تأكد من أن الجزء السفلي المسطح من الطرف مواز لسطح طرف المسبار ( الشكل 1 أ ).
2. تخدير الفأر ب 4٪ إيزوفلوران متبوعا بتخدير صيانة بنسبة 2.5٪ إيزوفلوران. افحص التخدير عبر مقياس التدفق. راقب مستوى التخدير حتى يصل إلى مستوى جراحي من التخدير من خلال إظهار فقدان منعكس سحب الدواسة.
3. ضع الماوس في وضع الانبطاح على وسادة التدفئة. استخدم مخروط أنف على شكل قمع لإبقاء الفأر تحت التخدير. احلق الرأس بالكامل باستخدام أداة تشذيب. استخدم مرهم الفازلين للعين على عيون الفأر لمنع الجفاف أثناء التخدير.

3. إعداد معلمات التأثير

ملاحظة: يشتمل نظام التأثير على صندوق تحكم لتعيين معلمات التأثير ، ومشغل لأداء الانحشار ، وإطار تجسيمي رقمي بمحاور من 3 حركات.

1. اضبط سرعة جهاز التأثير مسبقا على 4 م / ثانية ووقت السكون إلى 240 مللي ثانية على صندوق التحكم.

4. وضع مركز التأثير

1. ضع وسادة تدفئة ناعمة تحت جسم للحفاظ على درجة حرارة الجسم بالقرب من 39 درجة مئوية. قم بتركيب الماوس في إطار تجسيمي في وضع الانبطاح باستخدام قضبان الأذن الحادة.
2. اخفض طرف الصدمات بالقرب من رأس الماوس عن طريق تحريك محرك Z. اضبط طرف الصدمات المسطح (قطر 9 مم) عن طريق تحريك السائقين X و Y في منتصف الطريق إلى إحداثيات الهدف فوق الخيط السهمي.
3. تأكد من أن إحدى حواف طرف الصدمة موازية عموديا لخط أفقي وهمي مرسوم بين الأذنين ( الشكل 1C ). يتوافق مركز التأثير مع الخيط السهمي المركزي في منتصف الطريق بين الغرز الأمامية واللامدويد (بين الأذنين 9 مم إلى 0 مم ، الجانبي 4.5 مم).

5. إعداد عمق التأثير

1. لضبط عمق التأثير بشكل صحيح ، استخدم طرف مسبار إضافي لاستبدال طرف الصدمات المعزول المطلي بمطاط السيليكون.
2. للتأكد من عدم وجود تحول في مركز التأثير بعد تبديل النصائح ، اضبط القناة X و Y على لوحة التحكم التجسيمية الرقمية على الصفر قبل تبديل الأطراف.
3. حرك طرف المسبار إلى مركز منطقة التأثير عن طريق تحريك محركات الأقراص X وY يدويا.
4. قم بقص مستشعر التلامس على ذيل الماوس.
5. حرك المصادم (محرك Z) لأسفل حتى يلامس طرف المسبار سطح موقع الاصطدام.
6. اضبط قناة Z على لوحة التحكم التجسيمية على الصفر.
7. حرك طرف الصدمات مرة أخرى إلى منطقة التأثير عن طريق ضبط المشغلين X وY يدويا (وليس الأزرار الصفرية على لوحة التحكم التجسيمية الرقمية) حتى تصبح المشغلات X وY صفرا (حيث تم وضع طرف الصدمات مسبقا).
8. اسحب المشغل عن طريق تحريك مفتاح السحب الموجود في صندوق التحكم. حرك المصادم يدويا لأسفل (سائق Z) بمقدار 4 مم.

6. التأثير

1. قم بتشغيل التأثير بالنقر فوق مفتاح التأثير في مربع التحكم وحقق عمق تشوه يبلغ 4 مم.

7. ما بعد الانحشار

1. قم بقياس الوقت من الاصطدام حتى أول نفس للماوس باستخدام جهاز توقيت.
2. أخرج من الأداة وضعه على وسادة دافئة للحفاظ على درجة حرارة جسمه. لا تترك دون رقابة حتى يستعيد وعيه الكافي للحفاظ على الاستلقاء القصي.
3. اسمح للتعافي قبل إعادة إلى قفص نظيف. لا تعيد إلى صحبة الأخرى حتى يتعافى تماما.
4. راقب ووزن الفئران يوميا. إذا ظهرت على الفئران علامات الألم ، فقم بحقنها داخل الصفاق مع ميلوكسيكام بمعدل 1 - 2 مجم / كجم كل 12 - 24 ساعة.

8. الانحشار المتكرر

1. إعطاء الفئران إصابات إضافية في الأيام 4 و 7 و 10 بعد الإصابة الأولية (فاصل 72 ساعة بين التأثيرات).

النتائج

الشكل 1. نموذج فأر لإصابة الرأس المتكررة بارتجاج المخ. (أ) طرف مطلي بمطاط السيليكون بسمك 1 مم بقطر 9 مم مع طرف مسبار. (ب) يتم تركيب الماوس في إطار تجسيمي في وضع الانبطاح مع وسادة تسخين ناعمة أسفل الجسم. (ج) تحديد موضع مركز التأثير. حافة طرف الصدمات موازية عموديا لخط أفقي وهمي مرسوم بين الأذنين. يتوافق مركز التأثير في منتصف ...

المواد

<فئة الشكل = نمط الجدول = 'العرض: 102.17٪;'><فئة الجدول = 'ck-table-ressize'>قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات Anesthesia machineEagle Eye Anesthesia, Inc model 150anesthesiaElectromagnetic ImpactorLeicaBiosystemsImpact One Stereotaxic Impactorperform impactionDigital Stereotaxic InstrumentLeicaBiosystems39462501تركيب الماوس ونصائح تحديد المواقع< نمط TD = 'نمط الحدود: لا شيء ؛ الارتفاع: 15.5 نقطة ؛ العرض: 185 نقطة ؛ '>طرف معدني مطلي بمطاط السيليكون < نمط td = 'نمط اليسار الحدود: لا شيء ؛ نمط الحدود العلوي: لا شيء ؛ العرض : 231pt ؛ '>أداة الدقة والهندسة ، Gainesvill FL< td style = 'نمط اليسار الحدود: لا شيء ؛ نمط الحدود: لا شيء ؛ العرض : 89pt ؛ '>حسب الطلب < نمط TD = 'نمط اليسار الحدود: لا شيء ؛ نمط الحدود: لا شيء ؛ العرض: 145pt ؛ '> طرف التأثير Lithium Ion All-in-One TrimmerWAHL Home Products9854-600shave hair mouse stylepaper clipscustom-made probe tipCotton tipled prelicatorsMEDLINEMDS202055 فرك الرأس بالمحلول الملحي