تمت مراجعة جميع الإجراءات المتعلقة بالنماذج الحيوانية من قبل اللجنة المؤسسية المحلية لرعاية ومجلس المراجعة البيطرية في JoVE.
1. المواضيع
- استخدم ذكور فئران Sprague-Dawley (250-300 جم عند الوصول).
- إيواء الفئران في أقفاص صلبة القاع في غرفة مستعمرة برطوبة 40-60٪ ودرجة حرارة الغرفة (RT) 21 ± 1 درجة مئوية.
- اجعل الماء والطعام متاحين في libitum.
- احتفظ بالفئران تحت دورة مظلمة / ضوئية معكوسة 12:12 ساعة (الأضواء مضاءة في 20 ساعة).
2. الجراحة
- لكل فأر ، قم بإعداد قطعتين من رباط الأمعاء الكروميك (5-0) بطول 6 سم تقريبا ووضعهما في محلول ملحي معقم لتجنب الجفاف وتصبح قاسية وهشة.
- تخدير بالبنتوباربيتال (60 مجم / كجم ، داخل الصفاق [IP]) وعلاجه بالأتروبين (0.1 مجم / كجم ، IP.). راقب مستوى التخدير عن طريق مد ساق واحدة وقرص شبكة الجلد بين أصابع القدم بأظافر لضمان الضغط الكافي. تأكد من أن لا يثني أطرافه. إذا لزم الأمر ، قم بإعطاء بنتوباربيتال إضافي.
- احلق رأس الجرذ بحيث يمكن عمل شق في منتصف خط فروة الرأس بحوالي 25 مم مع مسافات متساوية أمام وخلف مركز العينين.
- ثبت رأس الفئران في إطار تجسيمي أو قم بتثبيت رأس الفئران بطريقة أخرى. ضع الجرذ على وسادة ساخنة للحفاظ على درجة حرارة الجسم.
- ضع مرهم العيون على كلتا العينين لمنع التلف الناتج عن الجفاف.
- افرك منطقة الرأس المحلوقة بالكحول ، ثم البيتادين.
- قم بعمل شق في منتصف خط فروة الرأس ، مع كشف الجمجمة وعظام الأنف.
- استخدم مجهر العمليات لتنفيذ الخطوات من 2.9 إلى 2.16.
- قم بتشريح حافة المدار الخالي من العظام ، المكونة من عظام الفك العلوي والجبهة والدمعية والوجنية ، باستخدام مسحة ذات رؤوس قطنية وزوج من ملقط دومون. استخدم المسحة لامتصاص الدم من النزيف المحتمل.
- لإتاحة الوصول إلى العصب تحت الحجاج (IoN) ، قم بتحويل محتويات الحجاج برفق باستخدام قطعة قطن دقيقة ، مع الحرص على عدم إفراط في تمدد العصب الغربالي الأمامي الذي يعبر فوق IoN. قم بتشريح IoN الخالي من النسيج الضام المحيط ، باستخدام مسحة دقيقة ذات رؤوس قطنية وزوج من ملقط Dumont باستخدام حركة منتشرة. استخدم المسحة لامتصاص الدم من النزيف المحتمل.
- لإجراء ربط ، ادفع أحد طرفي قطعة واحدة من الأمعاء الكرومية لأسفل على طول العظم الأمامي ، وسطي إلى IoN وتقدم بضعة ملليمترات موازية وأدنى من IoN. يتم تثبيت الرباط الآن في مكانه بين IoN والعظم الأمامي.
- انزلق طرف ملقط دومون بزاوية 45 درجة أسفل IoN لوضعه على مقربة من الرباط. اسحب IoN برفق بشكل جانبي للكشف عن الرباط وطرف الملقط. أمسك الرباط بالملقط واسحب الملقط بشكل جانبي من تحت IoN.
- اسحب الرباط من التجويف المداري حتى يصبح طرفي الرباط على مسافة متساوية إلى حد ما من IoN.
- قم بعمل "عقدة انزلاقية" من طرفي الرباط للسماح بالتحكم التام في درجة الانقباض وحرك العقدة ضد IoN. حرك العقدة أكثر لتضييق IoN بحيث يتم تقليل قطر العصب بمقدار ملحوظ. قم بعمل عقدة عادية أعلى عقدة الانزلاق بحيث يظل مقدار الانقباض ثابتا (على سبيل المثال ., لمنع عقدة الشق من الانزلاق).
- قطع الأربطة لتترك ما يقرب من 2 مم من الأطراف الحرة من العقدة.
- كرر نفس الإجراء (الخطوات من 2.11 إلى 2.15) لإجراء ربط ثان بفارق 2 مم عن الأول.
- بالنسبة للجراحة الوهمية ، قم بإجراء الخطوات من 2.2 إلى 2.10.
- أغلق شق فروة الرأس باستخدام خيوط البوليستر (4-0) واترك الجرذ يتعافى على وسادة ساخنة. لا تترك دون رقابة حتى يستعيد وعيه الكافي للحفاظ على الاستلقاء القصي ولا تعيد إلى صحبة الأخرى حتى يتعافى تماما.
- لتجنب التأثيرات المسكنة الوقائية على تطور ألم الاعتلال العصبي، لا تعطى التسكين للألم بعد الجراحة.