توليد نموذج الفئران لتبديل ورم العصب الظنبوبي

الملخص

المصدر: Brakkee، E. M.، et al. الجراحة والاختبارات السلوكية في نموذج تبديل ورم العصب الظنبوبي في الفئران. J. Vis. Exp. (2023).

يوضح هذا الفيديو إجراء لتوليد نموذج تبديل ورم العصب الظنبوبي للفئران (TNT). بعد تعريض العصب الظنبوبي في الساق الخلفية لفأر مخدر ، قم بعبور العصب. بعد ذلك ، قم بإنشاء نفق تحت الجلد ، وقم بتمرير العصب المقطوع عبر النفق ، وخياطته في مكانه. في حالة عدم وجود هدف لإعادة التعصيب ، تشكل النتوءات المحورية غير المنظمة من العصب المقطوع ورما عصبيا ، مما يؤدي إلى ألم الأعصاب عن طريق مستقبلات الألم المثيرة.

البروتوكول

تمت مراجعة جميع الإجراءات المتعلقة بالنماذج الحيوانية من قبل اللجنة المؤسسية المحلية لرعاية ومجلس المراجعة البيطرية في JoVE.

1. التخدير والتحضير

ملاحظة: أجريت هذه الدراسة على 15 فأرا من ذكور Sprague Dawley يبلغ من العمر 12 أسبوعا.

1. تخدير عن طريق التحريض باستخدام 5٪ إيزوفلوران والحفاظ على التخدير بنسبة 2٪ -3٪ من الأيزوفلوران.
   ملاحظة: عادة ما تؤدي الصيانة باستخدام 2٪ من الأيزوفلوران إلى تخدير كاف وتنفس تلقائي ، دون الحاجة إلى التنبيب الرغامي أو التهوية الميكانيكية.
2. تحقق من ردود أفعال عن طريق الضغط على القدم بالملاقط. تأكد من أن لا يستجيب قبل المتابعة. احلق المجال الجراحي من الركبة إلى الكاحل باستخدام ماكينة حلاقة كهربائية وقم بتطبيق مرهم العيون على العينين لمنع الجفاف. حقن 0.5 ملغ/كغ من الكاربروفين المسكن تحت الجلد في منطقة البطن.
3. ضع الجرذ المخدر على ظهره مع رأسه إما إلى اليسار أو اليمين والساق المراد إجراء العملية بالقرب من الجراح. قم بتدوير الطرف الخلفي السفلي بحيث يواجه الكعب الإنسي لأعلى. ضع الجرذ تحت مجهر جراحي ستيريو بتكبير 6x.
4. قم بتطهير المنطقة المحلوقة بثلاث جولات متناوبة من المقشر الموجود باليود متبوعا بالكحول. ضع ورقة معقمة بها ثقب جراحي على الساق ، بحيث يكون المجال الجراحي فقط مرئيا. تأكد من الحفاظ على هذه الظروف المعقمة أثناء الجراحة.

2. الجراحة

1. ضع قطعة قطن صغيرة أسفل الكاحل من أجل الحفاظ على مجال الجراحة أفقيا. حدد موقع الركبة وقم بعمل شق طولي بطول 1-2 سم برفق باستخدام مشرط فوق الجانب الإنسي من المخلب الخلفي من منتصف الساق إلى الكاحل. إذا لزم الأمر ، افتح الجلد والجلد بمزيد من اللازم باستخدام مقص دقيق حتى تظهر طبقات العضلات.
2. حدد الحزمة الوعائية العصبية السطحية على أنها اثنين أو ثلاثة من الخطوط البيضاء والأرجواني / الأحمر السميك ، وأحيانا مع فروع صغيرة ، والتي يمكن أن تتحرك بحرية فوق طبقات العضلات. باستخدام الكي الكهربائي ( انظر جدول المواد) ، تخثر أي نزيف نشط أو ناز في مجال الجراحة. احرص على عدم إتلاف الحزمة الوعائية العصبية.
3. تشريح صريح لفتح اللفافة بين عضلات المعدة ، خلف الحزمة الوعائية العصبية السطحية 2.2. بين لفافة العضلات ، يمكن العثور على العصب الظنبوبي. يبلغ حجم العصب الظنبوبي حوالي ثلاثة أضعاف حجم العصب السطحي في الحزمة العصبية الوعائية. استخدم عظم الظنبوبة كمعلم إضافي (يقع العصب الظنبوبي خلف عظم الظنبوب مباشرة).
4. تحديد العصب الظنبوبي وتشعبه.
   ملاحظة: عادة ما يكون التشعب مرئيا بخط أخف طوليا فوق العصب.
5. قم بتشريح العصب الظنبوبي بعناية بعيدا عن حزم الأوعية الدموية المحيطة. قم بإجراء التشريح عن طريق تحريك العصب الظنبوبي بصراحة وقطع الأنسجة المكشوفة التي تظهر بعض التمدد أثناء تحريك العصب الظنبوبي.
   ملاحظة: إذا كان العصب الظنبوبي متصلا بعبور الأوردة بعد التشريح ، فيمكن تخثر هذه الأوردة من أجل كشف العصب الظنبوبي بالكامل. احرص على عدم تخثر حزمة الظنبوب نفسها.
6. كشف العصب الظنبوبي بالقرب منه حتى يختفي تحت طبقة عضلية متقاطعة. في هذه المرحلة ، يبدو أن العصب الظنبوبي يغوص بعمق أكبر في المخلب الخلفي باتجاه الركبة. كشف العصب الظنبوبي بعيدا حتى الكاحل.
   ملاحظة: عندما يتعرض العصب الظنبوبي بشكل بعيد ، ستزداد كمية ألياف الكولاجين المتقاطعة (أي الألياف المتعامدة مع اتجاه الألياف العصبية). يجب قطع ألياف الكولاجين هذه لتمكين الطول الكافي لنقل العصب الظنبوبي.
   1. عندما ينكشف العصب الظنبوبي بالكامل ، ضع طبقات العضلات مرة أخرى لتجنب جفاف العصب. إذا كان العصب يجف (أي يصبح أكثر صلابة وباهتة وتجعيد) ، ولم يكن التغطية بطبقات العضلات كافيا ، أضف قطرات من المحلول الملحي لترطيبه.
7. باستخدام أداة الجراحة المجهرية الحادة ، ويفضل أن تكون حامل إبرة دقيقة ، قم بتشريح الجلد الظنبوبي من طبقة العضلات تحت الجلد من أجل عمل نفق تحت الجلد. للقيام بذلك ، امسك الجلد لأعلى وادفع الطرف الحاد في الأنسجة ، بالتوازي مع الجلد. تأكد من أن نهاية النفق تقع مسبقا أو بشكل جانبي لضمان سهولة الوصول إلى المنطقة لاختبار الورم العصبي.
8. قم بزيادة الأيزوفلوران إلى 5٪. ارجع إلى العصب الظنبوبي وقم بفضحه (أي العودة إلى المكان الموضح في الخطوة 2.6). قطع العصب الظنبوبي (أي كلا الفرعين الأخمصيين) في أقصى مستوى بالقرب من الكاحل. خفض الأيزوفلوران إلى المستوى الطبيعي من 2٪ -3٪.
9. قم بتغيير تكبير المجهر إلى 10x أو 16x. حدد epineurium للعصب الظنبوبي القريب من القطع الذي تم إجراؤه في الخطوة 2.8 ، أو في حالة حدوث تشعب أكثر قرب من العصب الظنبوبي ، حدد epineurium لكل من الفروع الأخمصية الإنسية والجانبية القريبة من القطع في الخطوة 2.8.
   ملاحظة: يكون epineurium أكثر بياضا وثباتا مقارنة بالألياف العصبية الموجودة بداخله ، والتي تكون أكثر صفراء ونعومة.
10. ضع بعناية 8-0 خياطة النايلون ( انظر جدول المواد ) من خلال epineurium لنهاية العصب القريب عن طريق إمساك epineurium بعناية بالملاقط ووضع الإبرة بين العصب و epineurium مع لدغة حوالي 0.5 مم. اسحب الخيط من خلاله وخذ قضمة بالإبرة تحت الجلد في نهاية النفق تحت الجلد المصنوع في الخطوة 2.7. اصنع عقدة ، والتي ستنقل العصب بشكل جانبي إلى النفق تحت الجلد.
    ملاحظة: إذا كان كلا الفرعين الأخمصيين يشتركان في epineurium مشترك ، فيجب أن تكفي خياطة واحدة. إذا كان كلا الفرعين الأخمصيين لهما epineurium خاص بهما ، فيجب تثبيت كل epineurium على حدة. تجنب وضع الخيط من خلال الجلد. فقط إصلاحه تحت الجلد.
11. ضع خياطة أكثر سمكا ذات لون غامق (يفضل خياطة زرقاء أو سوداء 4-0) متدفقة إلى نهاية العصب الثابت ، دون اختراق الجلد. تأكد من أن الخيط مرئي من خارج الجلد. تحقق مما إذا كان العصب يظل في مكانه بعد تحريك المخلب والعضلات. اقطع نهايات الخيط بنهاية خياطة أطول قليلا في 4-0 مقارنة ب 8-0 خياطه.
12. قم بتغيير تكبير المجهر مرة أخرى إلى 6x. أغلق الجلد بخيوط داخل البشرة باستخدام 8-0 قم بخياطة البشرة وتنظيفها بلطف باستخدام 0.9٪ كلوريد الصوديوم باستخدام قطعة قطن.

3. علاج ما بعد الجراحة

1. ضع الجرذ في قفص نظيف تحت منشفة ورقية في وضع مريح. إذا كانت الغرفة باردة ، ضع وسادة حرارية أسفل جزء من القفص (فقط تحت جزء من القفص حيث يجب أن يكون قادرا على الهروب من الحرارة عند الحاجة). ضمان سهولة الوصول إلى الطعام والماء.
2. لا تترك الجرذ بعد الجراحة دون رقابة حتى يستعيد وعيه الكافي للحفاظ على الاستلقاء القصي. يمكن إعادة الجرذ إلى صحبة الأخرى عندما يتعافى تماما من التخدير بعد الجراحة. يحدث هذا عادة بعد 1 ساعة وعندما يظهر الجرذ نمط المشي الطبيعي وسلوكه.
3. بعد 24 ساعة و48 ساعة من الجراحة، يتم تطبيق جرعة 0.5 ملغم/كغ من الكاربروفين تحت الجلد (منطقة البطن) لعلاج آلام ما بعد الجراحة.

المواد

<فئة الشكل = نمط الجدول = 'العرض: 840 نقطة ؛ '><فئة الجدول = 'ck-table-ressize'> < col style = 'العرض: 22.02٪ ؛ '>< col style = 'width: 37.5٪ ؛ '> <قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة الاسم الشركة رقم فهرسي التعليقات td style = 'border-top-style: none ؛ الارتفاع: 14.5pt ؛ '>Carprofen < td style = 'border-left-style: none ؛ border-top-style: none ؛ '>الصيدلية البيطرية المحلية < td style = 'border-left-style: none ؛ '>n / aCotton swabsNobamed974255 ElectrocauteryFine Science Tools18010-00 Ethanol 70٪Interchema BV400406Johnson & Johnson1854GIMPORTANT: يجب أن يكون اللون أزرق أو أسودEthilon 8.0Johnson & JohnsonBV130-5 Isoflo, isoflurane ZoetisDechra Veterinary ProductsB506 Mesh sil-silages styleStoeltingCo57816 and 57824<td style='border-left-style:none;'> td style='border-top-style:none;' Fine Science Tools11251-35 Micro needle holderFine Science Tools12076-12 Micro scissorsFine Science Tools15019-10 ملاقط صغيرةFine Science Tools11254-20 NaCl 0.9٪TrademedH7 1000-FRE Needle HolderFine Science Tools12004-16 Ophthalmic Ointmentlocal veterinary الصيدليةn/athe the pharmacy البيطرية المحلية تصنع مرهم العيونScalpelFine Science Tools10003-12 ScissorsFine Science Tools14001-12 Stereo-surgical StereoLeicaA60 F Sterile sheet with holeEvercare OneMed1555-01 الشفرة الجراحية nr.15Fine Science Tools10015-00 TweezersFine Science Tools11617-12