تمت مراجعة جميع الإجراءات المتعلقة بالنماذج الحيوانية من قبل اللجنة المؤسسية المحلية لرعاية ومجلس المراجعة البيطرية في JoVE.
} ملاحظة: إيواء جميع في درجة حرارة الغرفة تبلغ 22-201224 درجة مئوية (درجة مئوية) وحافظ على دورة ضوء/ظلام مدتها 12 ساعة. توفير الوصول المجاني إلى المياه والحبيبات والنظام الغذائي للتبن المخصص في كل مرة. تم إجراء التحليلات الإحصائية باستخدام اختبار Wilcoxon-Mann-Whitney-U غير البارامتري. واعتبرت القيمة الاحتمالية (ع) البالغة 0.05 ≤ ذات معنوية.
1. مرحلة ما قبل الجراحة
- قم بإجراء فحص سريري مفصل قبل الجراحة لجميع الأرانب المخطط لها للجراحة بجوار غرفة عمليات هادئة ومعقمة مباشرة ، مع الحفاظ على درجة حرارة 23 ± 3 درجة مئوية.
- سجل وزن كل مجهريا وتقييم الأغشية المخاطية ، وقت إعادة تعبئة الشعيرات الدموية وجودة النبض.
- علاوة على ذلك ، قم بإجراء التسمع القلبي باستخدام سماعة الطبيب وجس البطن.
- بناء على النتائج السريرية ، قم بإسناد تصنيف الجمعية الأمريكية لأطباء التخدير (ASA) إلى كل أرنب19. قم بتضمين التي حصلت على درجة ASA I فقط في الدراسة.
- احلق كلتا الأذنين الخارجيتين باستخدام ماكينة حلاقة كهربائية وضعي كريم بريلوكائين-ليدوكائين على كل من الشرايين والأوردة الأذنية.
- تخدير الأرنب بمزيج من 20 ملليغرام (مجم) / كيلوغرام (كجم) من الكيتامين ، و 100 مجم / كجم من ديكسميديوميدين ، و 0.3 مجم / كجم من الميثادون المحقون تحت الجلد (SC) عبر حقنة.
- اترك كل دون إزعاج لمدة 15 دقيقة على الأقل.
- بعد ذلك ، تحت الأكسجين الإضافي مع 3 لترات (لتر) / دقيقة (دقيقة) من خلال قناع الوجه الفضفاض والمراقبة المستمرة من خلال مقياس التأكسج النبضي ، ضع قنية 22 جم في الشريان المركزي الأذني الأيسر وقنية أخرى 22 جيجا في الوريد الأذني للأذن المقابلة.
- حلق المجال الجراحي (الرقبة) وحقن 0.75٪ روبيفاكاين حول الشق داخل الجلد. بعد ذلك ، احلق الجبهة واستعد لوضع مستشعرات تخطيط كهربية الدماغ (EEG) للأطفال.
- تحفيز التخدير العام باستخدام البروبوفول 1-2 مجم / كجم عن طريق الوريد (IV) للتأثير. بعد ذلك ، قم على الفور بتنبيب القصبة الهوائية لجميع الأرانب بأنبوب سيليكون (3 ملليمترات (مم) القطر الداخلي) تحت سيطرة كابنوغرافيا. بعد ذلك ، انقل جميع الأرانب إلى غرفة العمليات ، وضعها في الاستلقاء الظهري ، وقم بتوصيل الأنبوب بنظام دائرة الأطفال.
- تحقيق تعميق التخدير وصيانته من خلال الأيزوفلوران في الأكسجين ، واستهداف أقصى تركيز إيزوفلوران في نهاية المد والجزر يبلغ 1.3٪.
- تأكد من المراقبة السريرية والآلية (قياس التأكسج النبضي ، دوبلر ، وضغط الدم الغازي ، ومخطط كهربية القلب 3 خيوط ، ومخطط كهربية الدماغ ، ومراقبة درجة حرارة المستقيم ، والغازات المستنشقة والزفير) حتى نزع الأنبوب الرغامي.
- للحفاظ على الترطيب ، يتم توفير لاكتات رينجر بمعدل تسريب مستمر (CRI) يبلغ 5 مل / كجم / ساعة من خلال الوصول الوريدي. تأكد دائما من التخدير المناسب باستخدام قرصات إصبع القدم بفاصل 10 دقائق.
- تطهير المجال الجراحي باستخدام بوفيدون اليود من manubrium sterni إلى زاويتي الفك. الآن ، قم بإجراء لف معقم للمجال الجراحي.
- أثناء الجراحة، يجب توفير تسكين الألم مع الليدوكائين بمعدل CRI يبلغ 50 ميكروغرام (ميكروغرام) / كجم / دقيقة والفنتانيل بمعدل 3 - ميكروغرام / كجم / ساعة. تطبيق التهوية التلقائية أو المساعدة وكذلك فرط التنسبئة المتساهل. إجراء تحليل غازات الدم الشرياني مرة واحدة على الأقل أثناء الجراحة.
- يعالج انخفاض ضغط الدم ذي الصلة (متوسط الضغط الشرياني < 60 مم زئبق) باستخدام النورادرينالين. منع انخفاض حرارة الجسم (درجة حرارة المستقيم ≤ 38 درجة مئوية) باستخدام وسادة تسخين أو نظام تسخين الهواء القسري.
2. المرحلة الجراحية - الخطوة الأولى
- ابدأ الجراحة بشق جلدي متوسط من الأقسامة إلى مستوى زوايا الفك / الحنجرة. قم بتشريح الجلد والأنسجة الرخوة بحدة باستخدام مشرط ومقص جراحي وملقط. افصل بين الجلدة السفلية والوسادة الدهنية وسطيا عن طريق التشريح الحاد.
- أدخل الحافة العلوية الأمامية للعضلة القصية الترقوية الخشائية وسطيا على الجانب الأيسر عن طريق التشريح الحاد باستخدام ملقط دقيق ومقص جراحي.
- من الناحية المجهرية ، قم بإجراء تحضير حاد وفصل CCA الأيسر بعناية عن العصب المبهم بعيدا لتجنب شلل جزئي في الحنجرة عن طريق استخدام ملقط دقيق ومقص جراحي ( الشكل 1 ). لاحظ أن تشعب CCA الأيسر بمثابة معلم أثناء الجراحة ( الشكل 2 و الشكل 3 أ ). لجميع الخطوات التالية ، استخدم موزع الأنسجة الرخوة لتحسين الرؤية الجراحية.
- بعد التحضير الناجح وتحرير CCA البعيد الأيسر من العصب المبهم ، يتم إعطاء البابافيرين (40 مجم / مل ، 1: 1 مخفف في محلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر 0.9٪) محليا. قم بحماية جميع أجزاء الأوعية باستمرار باستخدام مسحات دقيقة متبوعة بمزيد من إعطاء البابافيرين خارجيا. ضع CCA الأيسر المنقوع بالفلفل الحمض أسفل الأنسجة العضلية الذاتية لحماية الوعاء من الجفاف تحت ضوء مجهر العملية.
- تبديل الجانبين مع زيادة راحة الجراح أثناء العملية الجراحية. كرر نفس الإجراء الجراحي على الجانب الأيمن. تشريح CCA بعيدا وقريبا حتى المعالم المحددة مسبقا (تشعب الشريان السباتي على مستوى زوايا الفك / الحنجرة والوريد الوداجي الداخلي. الشكل 3 أ ، ب ). أعد إدخال الموزعة وقم بإعطاء المسحات الدقيقة والبافيرين كما هو موضح سابقا.
- قبل ربط CCA القريب الأيمن، يتم حقن الهيبارين (500 وحدة دولية (IU)/كغ) جهازيا عن طريق قسطرة الأذن الوريدية.
- استخدم المجهر الجراحي من الآن فصاعدا. أولا ، قم بربط CCA القريب الأيمن بخياطة 4-0 غير قابلة للامتصاص مباشرة في نهاية المعلم القريب المرئي مجهريا لتجنب أي توتر على الوعاء الشرياني.
- ثانيا ، قم بتطبيق رباط 6-0 غير قابل للامتصاص بالضبط 4 - مم بعيدا باستخدام مشبك وعاء للقياس ، مع الأخذ في الاعتبار أنه بعد القطع البعيد من أول 4-0 رباط ، ستكون الحقيبة الشريانية الناتجة بطول موحد يبلغ حوالي 3 - 20124 مم في كل ( الشكل 4 أ ، ج ).
- بعد شد الرباط 6-0 ، قم بتثبيت CCA الأيمن إلى أقصى حد ممكن باستخدام مشبك وعاء مؤقت (كما هو يستخدم عادة في جراحة تمدد الأوعية الدموية الدماغية) لتجنب أي تلف في البطانة ولإنشاء جزء طويل من الأوعية الدموية للري من أجل منع تجلط الدم ( الشكل 4 ب ).
- الآن قم بإجراء قطع بعيد إلى 4-0 رباط غير قابل للامتصاص. لحصاد الحقيبة الشريانية ( الشكل 4C ) ، قم بإجراء قطع ثان بعيدا إلى الرباط غير القابل للامتصاص 6-0.
- نظف الكيس الشرياني بدقة من جميع الأنسجة الرخوة وقم بقياس طوله وعرضه وعمقه ( الشكل 4C ) بمشبك الوعاء. إذا لم تكن هناك حاجة إلى مزيد من التعديل، احتفظ بالطعم الشرياني الذاتي في محلول هيباريني (500 وحدة دولية / 100 مل في كلوريد الصوديوم متساوي التوتر 0.9٪) في درجة حرارة الغرفة حتى الاستخدام الآخر.
3. تدهور الحقيبة الشريانية
- إذا كانت هناك حاجة إلى تدهور الحقيبة الشريانية ، فقم بتنظيفها بدقة من الأنسجة الرخوة واحتضانها مسبقا ب 100 وحدة دولية من إيلاستا الخنازير المذابة في 5 مل من Tris-buffer في درجة حرارة الغرفة في يوم التجربة لمدة 20 دقيقة. لا تستخدم تقنية الفرشاة. احتضان الكيس الشرياني داخل وخارج الضوء باستخدام شاكر.
- قبل وضع الكيس في محلول هيبارين من كلوريد الصوديوم متساوي التوتر بنسبة 0.9٪ ، اسحبه برفق ثلاث مرات لمدة 3 دقائق باستخدام ملقط تشريحي في محلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر بنسبة 0.9٪ لغسل ما تبقى من إيلاستا الخنازير.
- إذا لزم الأمر ، احتفظ بتجويف الحقيبة الشريانية مفتوحا بأنبوب دقيق مصنوع من السيليكون ؛ قم بحماية CCA الأيسر والأيمن بدقة أثناء العملية الجراحية بأكملها باستخدام حشوة دقيقة مبللة.
4. المرحلة الجراحية - الخطوة الثانية
- لمزيد من التحضير ل CCA ، ضع مسحة دقيقة مستديرة تحته مباشرة لتحريك الشريان بشكل أكثر سطحية. الآن ، ضع مسحة دقيقة واحدة مع حشوة أرجوانية أسفل CCA الأيسر في الثلث البعيد لتصور الشريان بشكل أفضل.
- اغسل CCA القريب الأيمن بمحلول 0.9٪ كلوريد الصوديوم متساوي التوتر مع 500 وحدة دولية من الهيبارين المذاب في 100 مل من كلوريد الصوديوم متساوي التوتر 0.9٪. من أجل إنشاء مفاغرة خالية من التوتر ، ضع CCA الأيمن تحت وسادة الدهون / العضلات المحيطة بالقصبة الهوائية باستخدام مقص جراحي لتثبيته في الجانب الأيسر. إزالة الأنسجة الرخوة للشريان.
- الآن قم بإجراء شق فم سمكة بطول 2 مم على الجانب القريب من CCA الأيمن باستخدام مقص صغير وملقط.
- قم بتغيير الجانب الموجود على طاولة العمليات. قص CCA البعيد الأيسر بمشبك وعاء مؤقت آخر متبوعا ب CCA الأيسر القريب مع اثنين من مشابك الوعاء المؤقتة. احم جميع أجزاء الأوعية الدموية المكشوفة من الجفاف تحت الضوء الجراحي باستخدام مسحات دقيقة مبللة.
- تحرير الثلث البعيد من CCA الأيسر تماما من الأنسجة الرخوة وإجراء بضع الشرايين. استخدم الملقط الدقيق الجراحي وامسك ببعض الأنسجة الرخوة برفق. الآن ارفع الشريان وشق CCA البعيد الأيسر ببطء باستخدام مقص جراحي. اغسل أجزاء الأوعية الدموية بالهيبارين (500 وحدة دولية مذابة في 100 مل من محلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر 0.9٪).
- بعد إجراء بضع الشرايين باستخدام ملقط دقيق منحني ومقص دقيق ، قم بتكبير بضع الشرايين الموجود في الثلث البعيد من CCA الأيسر بعيدا ، بقياس حوالي 2 ضعف قطر الشريان السباتي الأيمن للشريان السباتي والطعم الذاتي. هذا يسمح بتدفق الدم الكافي إلى الكيس الشرياني.
- أخرج الكيس الشرياني من المحلول الملحي الهباريني. ضع الكيس في المجال الجراحي ، حيث يتم التخطيط للتشعب. ابدأ في خياطة الجزء الخلفي من الشريان السباتي الأيمن غير القابل للامتصاص بخياطة 9-0 غير قابلة للامتصاص ، متبوعة بخيط على الجانب الخلفي الموجود في الجمجمة على مستوى شق فم السمكة. الانتهاء من خياطة الجزء الخلفي من البعيد إلى القريب بواسطة غرز مفردة.
- أثناء الخياطة ، حافظ على رطوبة جميع أكياس الإيلاستاز المحتضنة مسبقا مع الري المستمر. أثناء خياطة جدار الوعاء الدموي للكيس ، استخدم ملقطا جراحيا دقيقا منحنيا لفتح التجويف برفق بطرفه. عند خياطة أجزاء من CCA الأيسر أو الأيمن القريب ، استخدم ملقطا جراحيا دقيقا مستقيما. بعد ذلك ، قم بخياطة الجانب الخلفي الأفقي.
- بعد ذلك ، قم بخياطة الجانب الأمامي الأفقي ، بدءا من قبة تمدد الأوعية الدموية التي تنتقل إلى قاعدتها. بعد ذلك ، ابدأ بغرز مفردة بعيدة على الجانب الأمامي تتحرك بشكل ذيلي.
- في جميع الخطوات 4.5-8 أثناء خياطة المفاغرة ، انتبه فقط للإمساك بجزء من الوعاء الدموي بالقرب من بضع الشرايين لتجنب تضيق علاجي المنشأ. أيضا ، قم بترطيب جميع أجزاء الأوعية الدموية باستمرار أثناء العملية الجراحية بأكملها خارج اللمعة باستخدام حقنة مملوءة بمحلول كلوريد الصوديوم الهيباريني (500 وحدة دولية مذابة في 100 مل من كلوريد الصوديوم متساوي التوتر 0.9٪) وحمايتها بمسحات دقيقة مبللة.
- قبل الانتهاء من مفاغرة ، قم بري المركب بأكمله بمحلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر 0.9٪ داخل اللمعة (500 وحدة دولية مذاب في 100 مل من كلوريد الصوديوم متساوي التوتر 0.9٪). احذر من أن الأكياس الشريانية المعدلة باليلاستاز يجب أن تخيط في أسرع وقت ممكن بسبب ميلها القوي إلى الجفاف والتخثر. بسبب السلوك العدواني لتركيز الإيلاستاز المتبقي في الحقيبة فيما يتعلق بهضم الأوعية المحيطية ، استمر بسرعة في الجراحة لإعادة اختراق مجمع الأوعية الدموية بسرعة.
- قم بإزالة جميع المشابك الوعائية المؤقتة خطوة بخطوة.
- قم بإزالة المشبك البعيد من CCA الأيسر. اقبل النزيف الطفيف وقم بإبعاده عن طريق طبع مسحات دقيقة برفق على مفاغرة. بعد ذلك ، قم بإزالة مشبك CCA الأيمن ، واضغط برفق باستخدام مسحة دقيقة وملقط لتجنب تكوين الجلطة.
- إذا لزم الأمر، استبدل مشابك الأوعية الدموية المؤقتة لتوفير تخثر كاف. بعد ذلك ، قم بتخفيف مشابك الأوعية الدموية من الجانب الأيسر بالقرب من. إذا لزم الأمر في أي خطوة ، استبدل المشابك للسماح بالتخثر أو لإجراء إعادة الخياطة.
- في هذه المرحلة ، قم بإجراء تصوير الأوعية الفلورية لمركب الأوعية الدموية ( الشكل 5 )
ملاحظة: يتم إجراء تصوير الأوعية الفلورية عن طريق إعطاء 1 مل من الفلورسين الرابع ، باستخدام مرشحين للتردد الترددي ، وهاتف ذكي مزود بكاميرا فيديو ، وأضواء كاشفة للدراجة. وقد سبق وصف هذا الإجراء في مكان آخر20،21،22. - أخيرا ، أغلق موقع المنطوق. أعد تكييف وخياطة وسادة الدهون برفق باستخدام خياطة قابلة للامتصاص 3-0 بعقد مفردة لحماية مفاغرة. أغلق الجلد والجلد بنفس الطريقة.
5. مرحلة ما بعد الجراحة
- إيقاف إعطاء الأيزوفلوران والمسكن الجهازي في نهاية الجراحة وتوفير نزع الأنبوب الرغامي بمجرد عودة منعكس البلع.
- يجب تطبيق 0.5 ملغ/كغ من ميلوكسيكام الوريدي، و10 ملغ/كغ من الأسبرين الوريدي، و100 ميكروغرام من فيتامين ب 12 SC و20 ملغم/كغ من الكلاموكسيل الوريدي.
- توفير الأكسجين التكميلي والاحترار النشط حتى تستعيد الأرانب الاستلقاء القصي تلقائيا.
- إجراء متابعة ما بعد الجراحة ورعاية أربع مرات في اليوم خلال الأيام الثلاثة الأولى وفقا للمبادئ التوجيهية لتقييم وإدارة الألم في القوارض والأرانب23،24.
- يجب تطبيق تسكين ما بعد الجراحة عن طريق لصقة الفنتانيل (12 ميكروغرام/ساعة) توضع على الأذن الخارجية، وميلوكسيكام مرة واحدة يوميا لمدة ثلاثة أيام، والميثادون كعلاج إنقاذي SC، وفقا لورقة العلامات الخاصة بتقييم الألم. يجب تطبيق 250 وحدة دولية/كغ من الهيبارين منخفض الجزيئات (LMH) تحت الجلد لمدة ثلاثة أيام في جميع الأرانب.